[發明專利]促進釀酒酵母菌表達的乙型肝炎表面抗原共價交聯顆粒形成的方法

有效

• 申請號: 201310455366.3
• 申請日: 2013-09-29
• 公開（公告）號: CN103524604A
• 公開（公告）日: 2014-01-22
• 發明（設計）人: 朱征宇;饒洪沖;段琰
• 申請（專利權）人: 深圳康泰生物制品股份有限公司
• 主分類號: C07K14/02
• 分類號: C07K14/02
• 代理公司: 深圳市盈方知識產權事務所(普通合伙) 44303
• 代理人: 楊賢

技術領域

本發明涉及生物化學技術，尤其涉及一種促進釀酒酵母菌表達的乙型肝炎表面抗原共價交聯顆粒形成的方法。

背景技術

釀酒酵母菌表達的乙型肝炎表面抗原（HBsAg）經過純化，加佐劑后，制成乙肝疫苗，可預防乙型肝炎。這種HBsAg在菌體內表達后，自發地形成球形顆粒，顆粒內部為宿主菌的脂類，外部聚集了100多條HBsAg多肽，這種顆粒的免疫原性很差，HBsAg多肽亞單位通過非共價結合的疏水作用松散地粘結在一起，以下稱之為I型抗原。由于HBsAg富含半胱氨酸，在菌體外I型抗原逐步轉變成共價結合的形式，首先單個多肽通過二硫鍵結合成二聚體，以下稱之為II型抗原，II型抗原比I型抗原的免疫原性高5～10倍，I型抗原和II型抗原最后通過多肽間二硫鍵交聯，逐漸轉化為高免疫原性的抗原，以下稱之為III型抗原，III型抗原有高度的多肽間二硫鍵，此時顆粒平均直徑為22nm，其形態、化學性質和免疫原性等方面與天然HBsAg顆粒相似。

為提高釀酒酵母菌表達的HBsAg的免疫原性，常常采用化學處理的方式，如尿素法、高pH法、谷胱甘肽法、硫氰酸鹽法等，促使I型和II型抗原亞單位之間形成二硫鍵交聯，向III型抗原轉化。但上述方法如果過于劇烈或時間過長，會對HBsAg多肽鏈的一級結構和空間結構造成破壞，反之，又會處理不夠完全，達不到最佳效果。此外最終需要去除添加的化學物質，去除過程會增加純化工藝的復雜性，耗用更多的時間和物料成本，并且某些殘留的化學物質可能會對疫苗接種者造成潛在的傷害。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是：提供一種促進釀酒酵母菌表達的乙型肝炎表面抗原共價交聯顆粒形成的方法，該方法無需添加化學物質，以簡便、低成本的處理方式即可促進高免疫性抗原顆粒的形成，安全性高。

為解決上述技術問題，本發明采用如下技術方案：

一種促進釀酒酵母菌表達的乙型肝炎表面抗原共價交聯顆粒形成的方法，該方法包括以下步驟：

將釀酒酵母菌表達的重組乙型肝炎表面抗原在溫度為4-100℃的條件下，放置3個月-5分鐘時間，使其鏈間非共價結合的多肽和單個多肽通過二硫鍵結合形成的二聚體向多肽間二硫鍵共價交聯轉化，形成多肽鏈間共價交聯抗原顆粒。

優選地，所述釀酒酵母菌表達的重組乙型肝炎表面抗原的放置溫度為[60，100]℃，放置時間為90-30分鐘。

或者，所述釀酒酵母菌表達的重組乙型肝炎表面抗原的放置溫度為[37，60）℃，放置時間為96小時-90分鐘。

或者，所述釀酒酵母菌表達的重組乙型肝炎表面抗原的放置溫度為[25，37）℃，放置時間為90天-96小時。

或者，所述釀酒酵母菌表達的重組乙型肝炎表面抗原的放置溫度為[4，25）℃，放置時間為3個月-90天。

優選地，所述釀酒酵母菌表達的重組乙型肝炎表面抗原的放置溫度為100℃，放置時間為30分鐘。

或者，所述釀酒酵母菌表達的重組乙型肝炎表面抗原的放置溫度為60℃，放置時間為90分鐘。

或者，所述釀酒酵母菌表達的重組乙型肝炎表面抗原的放置溫度為37℃，放置時間為96小時。

或者，所述釀酒酵母菌表達的重組乙型肝炎表面抗原的放置溫度為25℃，放置時間為90天。

或者，所述釀酒酵母菌表達的重組乙型肝炎表面抗原的放置溫度為4℃，放置時間為3個月。

本發明的有益效果是：

本發明的實施例通過將釀酒酵母菌表達的重組乙型肝炎表面抗原在適當的溫度條件下放置適當時間，從而促進了其鏈間非共價結合和低度共價結合的抗原向二硫鍵鏈間共價交聯顆粒抗原的轉化，達到了無需添加化學物質，以簡便、低成本的處理方式即可促進高免疫性抗原顆粒的形成的效果，且安全性高。

下面結合附圖對本發明作進一步的詳細描述。

附圖說明

圖1是本發明提供的方法第一實施例中A批號釀酒酵母菌表達的重組HBsAg中I、II、III型抗原組分含量隨時間變化的示意圖。

圖2是本發明提供的方法第一實施例中B批號釀酒酵母菌表達的重組HBsAg中I、II、III型抗原組分含量隨時間變化的示意圖。

圖3是本發明提供的方法第一實施例中C批號釀酒酵母菌表達的重組HBsAg中I、II、III型抗原組分含量隨時間變化的示意圖。

圖4是本發明提供的方法第二實施例中A批號釀酒酵母菌表達的重組HBsAg中I、II、III型抗原組分含量隨時間變化的示意圖。