[發(fā)明專利]一種水酶法-半仿生法提取茶葉籽中黃酮的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310435228.9
• 申請(qǐng)日: 2013-09-23
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN103509062B
• 公開(kāi)（公告）日: 2016-11-30
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王曉琴;林莉
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 華僑大學(xué);貴州周以晴生物科技有限公司
• 主分類號(hào): C07G99/00
• 分類號(hào): C07G99/00
• 代理公司: 泉州市文華專利代理有限公司 35205
• 代理人: 廖仲禧

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于黃酮的提取領(lǐng)域，具體涉及一種水酶法集合半仿生法提取茶葉籽中黃酮的方法。

背景技術(shù)

我國(guó)是產(chǎn)茶大國(guó)，種植面積及產(chǎn)量均居于世界首位，茶樹(shù)資源豐富，每年茶籽產(chǎn)量約8億多公斤，但長(zhǎng)期以來(lái)人們對(duì)于茶葉籽的開(kāi)發(fā)利用不足，大部分茶葉籽都被白白浪費(fèi)掉了，國(guó)內(nèi)外對(duì)茶葉籽的研究主要集中在茶葉籽油的提取精煉和茶皂素的提取上，而對(duì)黃酮類物質(zhì)的研究開(kāi)發(fā)較少，開(kāi)發(fā)茶葉籽黃酮，避免資源浪費(fèi)有著十分重要的意義和廣闊的前景。

水酶法提取黃酮是一種較為高效環(huán)保的方法，但是水酶法的提取率還不太理想，一定程度上造成黃酮資源浪費(fèi)，而且由于茶籽中的兩性大分子物質(zhì)蛋白質(zhì)等物質(zhì)的存在，使富含油/水的水酶法提黃酮體系中不可避免的形成o/w型乳狀液（emulsion），這不但給體系分離帶來(lái)極大的挑戰(zhàn)，而且嚴(yán)重限制了提取率。

由于茶葉籽黃酮的提取純化工藝還不完善，因此尋找更為高效的提取方法提取茶葉籽黃酮具有重要意義。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種水酶法-半仿生法提取茶葉籽中黃酮的方法，將水酶法和半仿生技術(shù)相結(jié)合，顯著提高了茶葉籽中黃酮的提取率。

本發(fā)明采用如下的技術(shù)方案：

一種水酶法-半仿生法提取茶葉籽中黃酮的方法，包括以下步驟：

（1）茶葉籽粉制備：茶葉籽干燥去殼，粉碎過(guò)篩,得到茶葉籽粉；

（2）水酶法提?。喊凑詹枳逊叟c反應(yīng)液的料液重量/體積比為1：3-6，稱取茶葉籽粉，在此茶葉籽粉中先加入部分水，加熱3-8分鐘以消滅茶葉籽粉自身酶活性，然后冷卻至室溫，加入已配置好的酶液及剩余的水，得到茶葉籽粉混合液，攪拌均勻，在51-55℃、攪拌條件下酶解0.5-2.0h；

（3）半仿生法提?。涸诿附夂蟮牟枞~籽粉混合液中加入乙醇和水，使料液重量/體積比為1:25、乙醇的體積百分比濃度為60%，調(diào)節(jié)pH值為1.5-2.0，在80℃水浴中回流提取25-40min，然后在3500-4500r/min下離心5-15min，將離心后的上清液取出備用；濾渣用體積百分比濃度為60%的乙醇清洗，再分別調(diào)節(jié)pH至7-7.5和8.0-8.5重復(fù)上述的回流提取、離心分離步驟；合并三次離心液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)、干燥即得目的產(chǎn)物。

優(yōu)選地，所述步驟（2）中酶液為纖維素酶溶解于部分蒸餾水中制成，纖維素酶的用量為6-12mg/g茶葉籽粉；所述酶液配制時(shí)在0-5℃條件下快速進(jìn)行。

進(jìn)一步地，水酶法-半仿生法提取茶葉籽中黃酮的方法，包括以下步驟：

（1）茶葉籽粉制備：茶葉籽去殼，粉碎過(guò)篩，烘干至恒重,得到茶葉籽粉；

（2）水酶法提取：按照茶籽粉與反應(yīng)液的料液重量/體積比為1：4，稱取茶葉籽粉，先加入部分水，加熱4分鐘以消滅茶葉籽粉自身酶活性，然后冷卻至室溫，加入已配置好的酶液及剩余的水，得到茶葉籽粉混合液，攪拌均勻，在53℃、攪拌條件下酶解0.85h；所述酶液為纖維素酶溶解于部分蒸餾水中在0-5℃條件下快速制成，纖維素酶的用量為10mg/g茶葉籽粉；

（3）半仿生法提?。涸诿附夂蟮牟枞~籽粉混合液加入乙醇和水，使料液重量/體積比為1:25、乙醇的體積百分比濃度為60%，調(diào)節(jié)pH值為2.0，在80℃水浴中回流提取30min，然后在4000r/min下離心10min，將離心后的上清液取出備用；濾渣用體積百分比濃度為60%的乙醇清洗，再分別調(diào)節(jié)pH至7.4和8.0重復(fù)上述的回流提取、離心分離步驟；合并三次離心液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)、干燥即得目的產(chǎn)物。

采用上述方案后，本發(fā)明達(dá)到的有益效果為：通過(guò)酶法耦合半仿生法技術(shù)相結(jié)合，茶葉籽粉的總黃酮得率遠(yuǎn)高于按照農(nóng)業(yè)部行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)測(cè)出的茶葉籽粉黃酮得率，說(shuō)明采用該方法提取茶葉籽粉總黃酮具有明顯優(yōu)勢(shì)。

以下通過(guò)下列實(shí)驗(yàn)來(lái)具體說(shuō)明本發(fā)明的效果：

試驗(yàn)例1：提取方法篩選

在茶葉籽黃酮提取過(guò)程中，本發(fā)明人對(duì)提取工藝進(jìn)行了設(shè)計(jì)和選擇，以提取時(shí)間、茶葉籽黃酮含量為考察指標(biāo)，充分考慮水劑法、水酶法、水酶法-半仿生法三種方法對(duì)提取時(shí)間及黃酮含量的影響，進(jìn)行了一系列的選擇試驗(yàn)。

樣品A：按照農(nóng)業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)NY/T1295-2007《蕎麥及其制品中總黃酮含量的測(cè)定》中“7.1試樣制備”及“7.2試料溶液的制備”的方法制備樣品，即簡(jiǎn)單工藝為：茶葉籽去殼——粉碎——加入甲醇溶液在（65±2）℃下恒溫振蕩提取2小時(shí)——過(guò)濾——即得；