[發明專利]一株脈孢菌NY-2菌株及其應用

有效

• 申請號: 201310433380.3
• 申請日: 2013-09-22
• 公開（公告）號: CN103468590A
• 公開（公告）日: 2013-12-25
• 發明（設計）人: 李昉
• 申請（專利權）人: 青島科技大學
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;A01N63/04;A01P7/00;C12R1/645
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本項發明微生物農藥，具體講是一株四孢脈孢菌NY-2菌株及其應用。

背景技術

現代農業發展與人類健康、生態環境保護和農業可持續發展緊密聯系，而高效生物農藥的研究則成為新型農藥研究的熱點。通過高效微生物菌株的發酵產生具有生物活性的代謝產物,并將其用于病蟲草害的控制是目前創制新型生物農藥的重要途徑，具有研發空間廣、毒性低、特異性強、高效低殘留、不易產生抗藥性、環境相容性好、生產工藝簡單等優點。

脈孢菌(Neurospora)是一類多細胞絲狀真菌，也是一類重要的真核模式生物。它的遺傳規律奇特，代謝途徑多樣，活性機制獨特，不僅是遺傳學、分子生物學的重要研究對象，也日漸成為生產中的工程菌。同時該菌宿主廣泛，生長所需營養要求簡單，生長周期短，次級代謝產物化學多樣性較豐富，開發利用該菌株制備新型生物農藥具有高效、無公害的優勢。

發明內容

本項發明目的在于提供一株四孢脈孢菌NY-2菌株及其應用。

為充分達到以上目的，本發明采用的技術方案為：一株脈孢菌NY-2菌株，四孢脈孢菌NY-2（Neurospora?tetrasperma）保藏于中國典型培養物保藏中心，保藏日期：2013年7月16日，保藏號：CCTCC?M2013346。將所述脈孢菌于發酵培養基中靜置或搖床發酵培養15-30天，發酵產物待用。所述發酵培養基比例為馬鈴薯200g，葡萄糖20g，酵母浸膏3g，蛋白胨5g，蒸餾水1000mL。所述脈孢菌經發酵培養基的培養的產物用于制備生物農藥殺蟲劑。

將所述脈孢菌于發酵培養基中靜置或搖床發酵培養15-30天，發酵產物待用。將發酵產物用有機溶劑提取，提取物經柱色譜分離后，其產物用于制備生物農藥殺蟲劑。所述有機溶劑為：石油醚、乙酸乙酯、氯仿、丙酮、甲醇、乙醇或水中的一種或幾種。所述發酵產物進行柱層析分離，以石油醚:乙酸乙酯體系梯度洗脫。收集石油醚:乙酸乙酯體積比10:1和5:1的組分I和II可用于制備生物農藥殺蟲劑。所述層析柱可以采用硅膠柱、反相柱、凝膠柱或大孔樹脂中的一種或幾種。所述石油醚:乙酸乙酯體系洗脫梯度為100:1至1:1。

本發明所具有的優點：

本發明所述的脈孢菌NY-2菌株分離自山東安丘采集的牛蒡，通過PCR擴增18S-28SrDNA的ITS區段，測序結果與Genebank數據庫中已知菌株相應序列進行比對，與菌株Neurospora?tetrasperma（Accession?number:FJ176470.1）的相似度為100%。該菌株發酵產物可用于制備生物農藥殺蟲劑，具有生產工藝簡單、來源充足、周期短、成本低、綠色環保等特點，開發前景較好。

具體實施方式

為闡明對本項發明特征的理解，下面結合一些非限定性的實施實例對本發明做進一步闡述。本項發明所述的四孢脈孢菌NY-2（Neurospora?tetrasperma），保藏于中國典型培養物保藏中心，保藏日期：2013年7月16日，保藏號：CCTCC?M2013346，保藏單位地址：武漢市武昌珞珈山。

實施例1：鹽堿植物來源脈孢菌（Neurospora?tetrasperma）NY-2菌株分類。

1）菌種培養

按照微生物學實驗室常規培養方法，挑取少量保存于葡萄糖-瓊脂培養基的脈孢菌（Neurospora?tetrasperma）NY-2，接種于PDA平板表面，25℃培養7天，初期菌落呈稀疏的網狀，后期形成橙色分生孢子。

2）菌種初步鑒定

按照文獻方法（東北農業大學學報，2007,38,(1):101-106），通過PCR擴增18S-28SrDNA的ITS區段，測序結果與Genebank數據庫中已知菌株相應序列進行比對，與菌株Neurospora?tetrasperma（Accession?number:FJ176470.1）的相似度為100%。序列信息如下：