[發(fā)明專利]與小麥穗粒重主效基因位點緊密連鎖的分子標記及其獲取方法和應用

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310427364.3
• 申請日: 2013-09-18
• 公開（公告）號: CN103436533A
• 公開（公告）日: 2013-12-11
• 發(fā)明（設計）人: 許云峰;安調過;王瑞芳;童依平;劉冬成;張愛民;李濱
• 申請（專利權）人: 中國科學院遺傳與發(fā)育生物學研究所
• 主分類號: C12N15/11
• 分類號: C12N15/11;C12N15/10;C12Q1/68
• 代理公司: 石家莊國域專利商標事務所有限公司 13112
• 代理人: 蘇艷肅

1.一種與小麥穗粒重主效基因位點QKws.cas-6A緊密連鎖的分子標記，其特征在于該分子標記為Xcfd80.2和Xbarc146.1，其所述分子標記Xcfd80.2的左端引物序列如SEQ?ID?NO:1所述、右端引物序列如SEQ?ID?NO:2所述；所述分子標記Xbarc146.1的左端引物序列如SEQ?ID?NO:3所述、右端引物序列如SEQ?ID?NO:4所述。

2.一種與小麥穗粒重主效基因位點QKws.cas-6A緊密連鎖的分子標記的獲取方法，其特征在于它包括以下步驟：

以Xcfd80.2和Xbarc146.1標記引物對小麥品種京411的DNA分別進行PCR擴增，其PCR擴增體系為20?μl，包括：左、右端引物（10?μmol/L）各1.0?μl，10×Buffer?2.0?μl，Mg²⁺（25?mmol/L）?1.2?μl，Taq酶（5?U/μl）0.2?μl，dNTP（2.5?mmol/L）0.6?μl，DNA（30?ng/μl）2.0?μl，其余用ddH₂O補足；PCR擴增程序為：94℃預變性7?min；94℃變性30?s，60/51℃退火45?s，72℃延伸60?s，34個循環(huán)；72℃后延伸7?min；最后10℃終止反應；擴增產物分別在8%聚丙烯酰胺凝膠上電泳分離后，獲得對應的擴增產物的分子量分別為160?bp和142?bp，即為小麥穗粒重主效基因位點QKws.cas-6A的分子標記；其中Xcfd80.2標記左端引物序列如SEQ?ID?NO:1所述、右端引物序列如SEQ?ID?NO:2所述；Xbarc146.1標記左端引物序列如SEQ?ID?NO:3所述、右端引物序列如SEQ?ID?NO:4所述。

3.一種檢測小麥品種或品系的方法，其特征在于它包括以下步驟：

a．用Xcfd80.2和Xbarc146.1的標記引物對待測小麥品種或品系的DNA分別進行PCR擴增，其PCR擴增體系為20?μl，包括：左、右端引物（10?μmol/L）各1.0?μl，10×Buffer?2.0?μl，Mg²⁺（25?mmol/L）?1.2?μl，Taq酶（5?U/μl）0.2?μl，dNTP（2.5?mmol/L）0.6?μl，DNA（30?ng/μl）2.0?μl，其余用ddH₂O補足；PCR擴增程序為：94℃預變性7?min；94℃變性30?s，60/51℃退火45?s，72℃延伸60?s，34個循環(huán)；72℃后延伸7?min；最后10℃終止反應；

b．將上述擴增產物分別在8%聚丙烯酰胺凝膠上電泳分離后，如Xcfd80.2的擴增產物中分子量大小為160?bp的擴增片段和Xbarc146.1的擴增產物中分子量大小為142?bp的擴增片段同時出現(xiàn)，則該待測小麥品種或品系為具有增加穗粒重的主效基因位點QKws.cas-6A的品種或品系，否則，該待測小麥品種或品系屬于不具有該位點的品種或品系。

4.根據(jù)權利要求2所述的與小麥穗粒重主效基因位點QKws.cas-6A緊密連鎖的分子標記的獲取方法，其特征在于所述小麥品種京411的DNA是指對小麥品種京411植株的葉片分離提取后獲得的DNA。

5.根據(jù)權利要求2所述的與小麥穗粒重主效基因位點QKws.cas-6A緊密連鎖的分子標記的獲取方法，其特征在于所述8%聚丙烯酰胺凝膠是指100?ml聚丙烯酰胺溶液中含有7.8?g丙烯酰胺和0.2?g的甲叉丙烯酰胺。

6.根據(jù)權利要求3所述檢測小麥品種或品系的方法，其特征在于所述的小麥的品種或品系為以小麥品種京411為親本，通過采用常規(guī)雜交并繁衍至F₂代以上獲得的小麥品種或品系。