[發(fā)明專利]一種淀粉霉新菌株及其應用

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310425145.1
• 申請日: 2013-09-17
• 公開（公告）號: CN103497898A
• 公開（公告）日: 2014-01-08
• 發(fā)明（設計）人: 劉克鋒;王順利;王紅利;高程達;石愛平
• 申請（專利權）人: 北京農學院
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;C05F3/00;C05F3/02;C05F17/00;C12R1/645
• 代理公司: 北京瑞思知識產(chǎn)權代理事務所(普通合伙) 11341
• 代理人: 王加嶺

技術領域

本發(fā)明屬于堆肥領域，具體涉及一種堆肥用微生物及其應用。

背景技術

我國畜禽養(yǎng)殖業(yè)經(jīng)過近30年的快速發(fā)展，極大的滿足了城鄉(xiāng)居民對于肉蛋奶的需求。然而我國畜禽養(yǎng)殖迅速發(fā)展的同時，不可避免帶來每年超過20億噸畜禽糞污的產(chǎn)生，同時有大量的畜禽糞便不能及時消納，特別是快速興起的養(yǎng)殖小區(qū)的出現(xiàn)，導致糞污大面積堆積或隨意丟棄，不但使農業(yè)資源不能及時有效地利用，也已成為土壤、水體污染的主要污染源，并且將限制養(yǎng)殖業(yè)的可持續(xù)發(fā)展。2013年中共中央國務院一號文件再次重申了“強化農業(yè)生產(chǎn)過程環(huán)境監(jiān)測，積極開展農業(yè)面源污染和畜禽養(yǎng)殖污染防治”工作；北京市十二五發(fā)展規(guī)劃也將“研究廢棄物無害化處理和資源利用技術與裝備的系列化、標準化，提高生產(chǎn)能力”和“在調整高端農業(yè)產(chǎn)業(yè)布局的同時，高度關注農業(yè)發(fā)展對環(huán)境、能源和水資源的影響”列入工作重點。因此，在確保畜禽養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)有效發(fā)展、確保農民收入的前提下，有效地處置、利用畜禽廢棄物、減少環(huán)境和生態(tài)的污染風險迫在眉睫。

目前好氧堆肥是實現(xiàn)畜禽糞便資源化利用的最主要手段。然而傳統(tǒng)自然堆肥法由于堆肥初期有益微生物數(shù)量少，繁殖速度慢，因此發(fā)酵時間長、易產(chǎn)生臭味，堆肥效率低下。而在堆肥化過程中添加外源菌劑有利于畜禽糞便堆肥腐熟。但是當前市場上成熟的商品菌劑多為國外引進，價格昂貴，種類不多，應用范圍寬泛。接種這些外源菌劑，在初期容易出現(xiàn)堆料中土著微生物與之激烈的競爭，導致外源菌劑無法在堆料中快速定殖，因此發(fā)揮的作用大打折扣。同時，由于已有的商品菌劑大多缺乏針對性，在北方低溫季節(jié)接種后，堆料很難迅速升溫，無法及時發(fā)揮應有的作用。目前我國北方地區(qū)在低溫季節(jié)存在糞污無法及時的連續(xù)處理導致大量堆積、需要增加額外的糞污存儲場地或設施、有機肥生產(chǎn)在低溫季節(jié)無法正常運行等問題。因此篩選能在低溫季節(jié)使堆料迅速升溫的微生物菌株，對于解決北方地區(qū)糞污的連續(xù)處理和有機肥生產(chǎn)周年進行具有重要的實用價值。

發(fā)明內容

本發(fā)明首先提供淀粉霉（Amylomyces?rouxii）新菌株CZ1。

本發(fā)明還提供含有所述淀粉霉CZ1的菌劑。

本發(fā)明的菌株分離與篩選過程如下：

①采用平板稀釋法分別從新鮮牛糞、高溫發(fā)酵階段牛糞以及腐熟后的牛糞中進行微生物分離。稱取各樣品各10g分別放入裝有90mL無菌水的三角瓶中，在搖床上振蕩30min，使樣品充分分散，靜置20min后即為10^-1稀釋液，然后連續(xù)稀釋制成10^-2-10^-8濃度的稀釋液備用。取100μL各濃度的稀釋液，采用常規(guī)涂抹法用涂布器在改良高氏1號固體培養(yǎng)基上涂布，每個濃度梯度三個重復，分別置于25℃、35℃、50℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。3d后挑取平板上長出的單菌落，進一步純化培養(yǎng)，并于4℃保存。

改良高氏1號培養(yǎng)基，其中葡萄糖10.0g/L、蛋白胨5.0g/L、KNO₃1.0g/L、K₂HPO₄0.5g/L、MgSO₄·7H₂O0.5g/L、NaCl0.5g/L、FeSO₄0.01g/L、水1000ml、pH7.2、瓊脂1.5%-2.0%。

②根據(jù)菌株在纖維素—剛果紅平板上形成透明圈的快慢、透明圈明晰程度、透明圈與菌落直徑比值（D/d）的大小，篩選出了1株中溫菌，該菌株在培養(yǎng)的第2天即出現(xiàn)清晰的透明圈，在培養(yǎng)第4天D/d達到10.7。該菌株菌落邊緣不整齊絨毛長，草叢狀，潔白色，毛上有黑色孢子。

③測定該菌株的ITS序列進行分子生物學鑒定，所用引物為ITS1：TCCGTAGGTGAACCTGCGG(SEQ?ID?No.2)；ITS4：TCCTCCGCTTATTGATATGC(SEQ?ID?No.3)，序列如SEQ?ID?No.1所示，與其它公布的淀粉霉的ITS序列同源性為99%以上，鑒定為淀粉霉（Amylomyces?rouxii），命名為CZ1，并于2012年11月23日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，簡稱CGMCC，地址：北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號，中國科學院微生物研究所，保藏編號為CGMCC?No.6874。

本發(fā)明的淀粉霉CZ1可制備成菌劑，其中，淀粉霉CZ1的活菌數(shù)可為50億/克以上，優(yōu)選為100億/克以上。

本發(fā)明還提供所述生物菌劑的制備方法，其為在液體發(fā)酵培養(yǎng)基中發(fā)酵淀粉霉CZ1，將得到的發(fā)酵液即為生物菌劑。