[發明專利]一種篩選間變性淋巴瘤激酶抑制劑高通量篩選方法在審
| 申請號: | 201310421283.2 | 申請日: | 2013-09-12 |
| 公開(公告)號: | CN104458677A | 公開(公告)日: | 2015-03-25 |
| 發明(設計)人: | 嚴明;張陸勇;胡潔;高鵬 | 申請(專利權)人: | 中國藥科大學 |
| 主分類號: | G01N21/64 | 分類號: | G01N21/64 |
| 代理公司: | 暫無信息 | 代理人: | 暫無信息 |
| 地址: | 211200 江蘇省南京市*** | 國省代碼: | 江蘇;32 |
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| 摘要: | |||
| 搜索關鍵詞: | 一種 篩選 變性 淋巴瘤 激酶 抑制劑 通量 方法 | ||
1.一種間變性淋巴瘤激酶抑制劑高通量篩選模型,其特征在于,包括步驟:?
(1)激酶抑制劑篩選模型的建立與優化;?
(2)陽性藥驗證模型可靠性;?
(3)高通量篩選模型驗證。?
2.如權利要求1所述的方法,其特征在于,所述的激酶為間變性淋巴瘤激酶。?
3.如權利要求1所述的方法,其特征在于,步驟(1)中進行間變性淋巴瘤激酶濃度梯度、溫孵時間、底物濃度、ATP濃度實驗。
4.如權利要求3所述的方法,其特征在于,由步驟(1)可得到最佳反應所需的間變性淋巴瘤激酶濃度為0.1ng/μl,最佳溫孵時間為30min,最佳底物濃度為0.1μM,最佳ATP濃度為2.3μM。
5.如權利要求1所述的方法,其特征在于,步驟(2)選用步驟(1)所到的合適濃度的激酶,ATP?Km,底物Km;將激酶和底物按1:2體積混合,每孔加入4ul,再按濃度梯度每孔加入4ul陽性藥,最后每孔加入2ul?ATP開始反應,按優化時間室溫孵育;配制SA-XL665和TK-Ab,將SA-XL665和TK?Ab按體積比1:1混合,每孔加入10ul終止反應,室溫孵育1小時后檢測,分析數據得陽性藥半數抑制率IC50為42nM。?
6.權利要求1-5中所述任一方法在篩選間變性淋巴瘤激酶抑制劑的應用。?
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