[發明專利]一種利用混合模式層析介質連續分離純化抗體的方法

有效

• 申請號: 201310415434.3
• 申請日: 2013-09-12
• 公開（公告）號: CN103505908A
• 公開（公告）日: 2014-01-15
• 發明（設計）人: 史清洪;柴東升;孫彥;白姝
• 申請（專利權）人: 天津大學
• 主分類號: B01D15/18
• 分類號: B01D15/18;C07K1/22
• 代理公司: 北京三聚陽光知識產權代理有限公司 11250
• 代理人: 張建綱

1.一種混合模式層析柱串聯連續吸附裝置，其特征在于，包括串聯設置的n個填充有MEP?HyperCel層析介質或者配基密度為10-120mmol/g的以4（咪唑-1-基）苯胺為配基的混合模式層析介質的層析柱，用于從包含抗體和至少一種雜蛋白的生物原料中連續吸附抗體來分離純化抗體；

其中，所述以4（咪唑-1-基）苯胺為配基的混合模式層析介質是以平均粒徑為20-270μm的瓊脂糖凝膠、纖維素或羥基化甲基丙烯酸親水聚合物微球為基質，在所述基質表面偶聯烯丙基，然后通過烯丙基與N-溴代琥珀酰亞胺溴代反應得到的活化末端基團偶聯4（咪唑-1-基）苯胺為配基的層析介質，其結構式為M-L-AN；M表示基質，L表示由烯丙基活化引入的短鏈烷基，AN表示4（咪唑-1-基）苯胺。

2.根據權利要求1所述的一種混合模式層析柱串聯連續吸附裝置，其特征在于，所述以4（咪唑-1-基）苯胺為配基的混合模式層析介質的配基密度為21-70mmol/g。

3.根據權利要求1所述的一種混合模式層析柱串聯連續吸附裝置，其特征在于，所述配基密度為10-120mmol/g的以4（咪唑-1-基）苯胺為配基的混合模式層析介質的制備方法為：

經去離子水反復沖洗并抽干水分后的基質M與二甲基亞砜、氫氧化鈉溶液和烯丙基溴混合，混合液中二甲基亞砜的體積含量為3-60%，氫氧化鈉的摩爾體積濃度為0.01-4mol/L，基質M與烯丙基溴的質量體積比為0.1-20:1，混合液在25℃和170rpm的水浴搖床中反應1-64h獲得烯丙基活化介質M-L；其次，活化介質M-L反復洗滌后與水、二甲基亞砜和N-溴代琥珀酰亞胺混合，上述混合液中水與二甲基亞砜的體積比為0-10，二甲基亞砜的體積含量為3-70%，活化介質M-L與N-溴代琥珀酰亞胺的質量比為0.5-7:1，混合液在25℃和170rpm的水浴搖床中反應0.5-5h；最后，反應后的活化介質經去離子水洗滌并抽干水分后與4（咪唑-1-基）苯胺、氫氧化鈉溶液和二甲基亞砜溶液混合，活化介質M-L與4（咪唑-1-基）苯胺的質量比為0.008-0.64：1，二甲基亞砜與活化介質的體積質量比為0.2-5.0：1，氫氧化鈉的摩爾體積濃度為0.01-1.0mol/L，上述混合液在50℃和170rpm的水浴搖床中反應1-72h，即得。

4.根據權利要求1-3任一所述的混合模式層析柱串聯吸附裝置，其特征在于，n=2-5。

5.一種利用權利要求1-4任一所述的混合模式層析柱串聯吸附裝置連續分離純化抗體的方法，其特征在于，包括如下步驟：

（1）制備待層析分離的、含有目標抗體產品的生物原料樣品；

（2）將所述生物樣品用適當的平衡緩沖液進行稀釋，稀釋的生物樣品輸入到所述混合模式層析柱串聯連續吸附裝置；

（3）稀釋生物樣品輸入達到一定體積后，處于串聯連續吸附裝置最前端的層析柱離開吸附步驟進入到沖洗步驟；同時，一個經再生處理后的新層析柱則接入到串聯連續吸附裝置最末端；稀釋生物樣品繼續連續輸入到新的串聯連續吸附裝置中；

（4）向進入到沖洗步驟的吸附抗體的層析柱中輸入所述平衡緩沖液進行沖洗；

（5）用適用的洗脫緩沖液將抗體從經步驟（4）沖洗后的層析柱中洗脫，收集洗脫峰，獲得抗體溶液；

（6）依次輸入所述的再生緩沖液和平衡緩沖液以再生步驟（5）中經洗脫后的層析柱。

6.根據權利要求5所述的連續分離純化抗體的方法，其特征在于，所述步驟（6）中，還包括將再生后的層析柱接入到串聯連續吸附裝置最末端，繼續用于抗體的連續吸附及分離純化的步驟。

7.根據權利要求5-6任一所述的連續分離純化抗體的方法，其特征在于，所述步驟（4）中，還包括將所述沖洗的層析柱流出物收集的步驟，用于步驟（2）中所述的用于層析吸附的稀釋生物樣品中。

8.根據權利要求5-7任一所述的連續分離純化抗體的方法，其特征在于，所述步驟（2）中，還包括將所述稀釋的生物樣品離心的步驟，用于去除生物樣品中的不溶物和沉淀的雜質成分。