[發明專利]富含二萜酚類化合物的見血清提取物及其制備方法和用途

無效

• 申請號: 201310412661.0
• 申請日: 2013-09-11
• 公開（公告）號: CN103463443A
• 公開（公告）日: 2013-12-25
• 發明（設計）人: 茍小軍;宋芹;陳封政;郭曉強;顏軍;劉嵬
• 申請（專利權）人: 成都大學
• 主分類號: A61K36/898
• 分類號: A61K36/898;A61P7/02;A61P9/10;A61P35/00
• 代理公司: 成都科奧專利事務所(普通合伙) 51101
• 代理人: 王蔚

技術領域

本發明涉及一種見血清提取物及其制備方法和用途，特別是涉及一種富含二萜酚類化合物的見血清提取物及其制備方法和用途。

背景技術

見血清為蘭科植物脈羊耳蘭Liparis?nervosa(Thunb.)Lindl.的全草，又稱“立地好”、“黑蘭”、“矮胖兒”，性寒，味苦，涼血止血、清熱解毒。見血清常生長在山野、溪邊等陰濕處，分布于四川、湖北、臺灣等地，目前民間用藥材均為野生。

迄今，國內外對見血清的藥理作用及臨床報道較少，主要集中在見血清的止血活性上，還未見有見血清抑制血小板聚集活性、抗腫瘤活性的報道。

發明內容

本發明的目的之一在于提供一種富含二萜酚類化合物的見血清提取物的制備方法及該方法制得的見血清提取物。

本發明的目的之二在于提供上述見血清提取物在制備治療或預防因血小板過度聚集引起的血栓、心肌梗塞疾病藥物中的應用。

本發明的目的之三在于提供上述見血清提取物在制備治療乳腺癌、直腸癌、宮頸癌藥物中的應用。

本發明提供的一種富含二萜酚類化合物的見血清提取物的制備方法包括如下步驟：

（1）將見血清全草干燥后粉碎，然后加入其重量5～15倍的提取溶劑進行提取，得提取液，所述提取溶劑為水、甲醇、乙醇中的一種或一種以上；

（2）將提取液過濾、濃縮、干燥后用適量水進行分散，然后依次用石油醚或環己烷、乙酸乙酯萃取，回收乙酸乙酯得浸膏；

（3）將步驟(2)得到的浸膏上正相硅膠柱進行層析，用石油醚-丙酮梯度洗脫，收集體積比90:1～50:1洗脫部位，減壓回收溶劑；

（4）將步驟（3）得到的洗脫液進行反相C₁₈填料脫色，采用含甲醇的水溶液進行梯度洗脫，收集60%～80%甲醇水溶液洗脫部分，低溫減壓回收得到提取物。

進一步的，步驟（3）中采用體積比100:1、90:1、80:1、70:1、60:1、50:1、30:1、10:1的石油醚-丙酮進行梯度洗脫，收集體積比90:1～50:1洗脫部位。

進一步的，步驟（4）中采用濃度為0%、20%、40%、60%、80%、100%的甲醇水溶液進行梯度洗脫，收集60%～80%洗脫部分。

將步驟(4)得到的60%甲醇洗脫部位進行反復重結晶可制備得到迷迭香酚和表迷迭香酚，80%甲醇洗脫部位進行反復重結晶可制備得到鼠尾草酚。

本發明提供的一種富含二萜酚類化合物的見血清提取物由上述方法制得。

本發明還提供了上述見血清提取物在制備治療或預防由血小板過度聚集引起的血栓、心肌梗塞疾病藥物中的應用、以及在制備治療乳腺癌、直腸癌、宮頸癌藥物中的應用。

由于見血清中所含鼠尾草酚、迷迭香酚等活性成分為中低極性化合物，在提取時，適宜的醇濃度，可以提高見血清中活性成分的回收率，但對于見血清中活性成分的提取而言，上述提取方法及任意組合都可達到本發明所述的提取物。提取時見血清全草與溶劑的重量比以1:5～15為宜，考慮到提取物中活性成分的穩定性，應盡量在常壓及溶劑沸點范圍內進行提取。

本發明所提供的富含二萜酚類化合物的見血清提取物具有抑制血小板聚集活性和抗腫瘤活性，可用于制備治療或預防因血小板過度聚集引起的血栓、心肌梗塞等心腦血管疾病的藥物和治療乳腺癌、直腸癌、宮頸癌的藥物。

下面結合實施例對本發明做進一步詳細說明。

具體實施方式

實施例1見血清提取物的制備

將見血清全草干燥后粉碎，然后加入其重量12倍的80%乙醇冷浸提取3次，每次24小時，得綠褐色濾液，合并濾液，減壓回收乙醇得浸膏，將浸膏加適量水分散后，依次用石油醚、乙酸乙酯萃??；將乙酸乙酯部位浸膏上正相硅膠柱(200目)，用體積比100:1、90:1、80:1、70:1、60:1、50:1、30:1、10:1的石油醚-丙酮梯度洗脫，收集體積比90:1～50:1洗脫部位，減壓回收溶劑；再將所得浸膏上C₁₈反相柱脫色，采用濃度為0%、20%、40%、60%、80%、100%的甲醇水溶液進行梯度洗脫，收集60%～80%洗脫部分，低溫減壓回收得提取物。

該提取物對光、氧、熱不穩定，極容易被氧化變色，需避光避熱密封保存。采用紫外分光光度法測定提取物中總酚含量為80%。采用HPLC法(C₁₈柱；流動相：0.1%磷酸-60%乙腈；流速：1.0ml/min；檢測波長：230nm)檢測其中主要成分鼠尾草酚和迷迭香酚的含量之和為37%。

實施例2見血清提取物的制備