[發明專利]黃瓜單拷貝基因的染色體物理定位方法有效
| 申請號: | 201310409784.9 | 申請日: | 2013-09-11 |
| 公開(公告)號: | CN104419763B | 公開(公告)日: | 2017-01-18 |
| 發明(設計)人: | 婁群峰;張云霞;陳勁楓;何玉華;賈利;程春燕;李季 | 申請(專利權)人: | 南京農業大學 |
| 主分類號: | C12Q1/68 | 分類號: | C12Q1/68 |
| 代理公司: | 暫無信息 | 代理人: | 暫無信息 |
| 地址: | 210095 江蘇省南京*** | 國省代碼: | 江蘇;32 |
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| 摘要: | |||
| 搜索關鍵詞: | 黃瓜 拷貝 基因 染色體 物理 定位 方法 | ||
1.黃瓜單拷貝基因的染色體物理定位,其特征在于:
通過熒光原位雜交(FISH),能在黃瓜中期和粗線期染色體上檢測到片段小至2.0kb的單拷貝基因的FISH信號。
2.根據權利要求1所述的在黃瓜中期和粗線期染色體上檢測到最短長度為2kb的單拷貝基因的FISH信號,是通過以下方法獲得的:
1)黃瓜染色體上的單拷貝基因利用基因組DNA作模板,進行PCR擴增之后,1%的瓊脂糖凝膠電泳后,切膠回收;
2)利用切膠回收的DNA標探針,若回收產物不夠,可以切膠回收的DNA為模板,再進行二次PCR擴增,利用擴增后的產物標探針;
3)取酶解好的花藥或根尖,加入適量固定液制成懸濁液涂片,再利用涂片法制片,鏡檢,挑選染色體分散度高的制片,進一步利用胃蛋白酶消化去除細胞質后,干燥備用;
4)將標好的探針雜交到黃瓜染色體上,通過FISH檢測信號。
3.根據權利要求1所述的在黃瓜中期和粗線期染色體上檢測到了片段長度最小達2.0kb的單拷貝基因的FISH信號,是由于探針既沒有基因組DNA的干擾,并經過第二次PCR擴增之后,濃度較高,而且經過預處理的載玻片背景較干凈,易于探針雜交上去。
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