[發明專利]卵黏蛋白液體制劑及其制備方法

有效

• 申請號: 201310407056.4
• 申請日: 2013-09-09
• 公開（公告）號: CN103432576A
• 公開（公告）日: 2013-12-11
• 發明（設計）人: 馬美湖;單媛媛;黃茜
• 申請（專利權）人: 華中農業大學
• 主分類號: A61K38/57
• 分類號: A61K38/57;A61K38/40;A61K38/47;A61K47/26;A61K47/34;A61K47/18;A61K47/04;A61P31/04;A61P31/12
• 代理公司: 武漢開元知識產權代理有限公司 42104
• 代理人: 徐紹新

技術領域

本發明涉及一種高抗微生物活性的卵黏蛋白制劑及其制備方法。

背景技術

病原微生物的表面抗原性會經常不斷的發生變異，使得選育病毒疫苗株的過程費時費力，更重要的是疫苗的接種效果會因為病毒表面抗原的變異或漂移而降低。抗病毒化學藥物及抗生素是當前治療傳染病的最主要途徑，而這些藥物對機體均有一定的毒副作用，并且一些流感病毒及病原菌已經對部分藥物產生了耐藥性。基于這種形勢，在研制高效疫苗和藥物的同時，從豐富的自然資源中尋找和挖掘新的天然抗病毒活性成分已成為令人矚目的新領域。

在天然抗病毒活性成分中，抗病毒蛋白是重要的一類。目前已經從植物、昆蟲和海洋生物等物種中提取出多種抗病毒蛋白，而對我國乃至世界上產量豐富的蛋白資源——禽蛋中的抗微生物蛋白研究卻相對較少。實際上，禽蛋中存在多種抗微生物感染的活性蛋白質，如卵黏蛋白、轉鐵蛋白、抗生物素蛋白以及溶菌酶等，其中的卵黏蛋白是非常重要的抗菌抗病毒蛋白質之一。同很多粘蛋白家族成員一樣，卵黏蛋白是一種含有唾液酸殘基的巨大分子量的硫酸酯糖蛋白，現有的研究已經發現卵黏蛋白具有較好的抗菌抗病毒活性，其對多種病毒引起的血球凝集反應具有很好的抑制作用。然而到目前為止，尚未有卵黏蛋白產品能夠達到商業應用的水平，其中兩個很重要的原因是卵黏蛋白經過純化制備過程后會造成抗菌抗病毒活性的損失，另外其較低的溶解性無法達到其發揮活性需要的濃度。

發明內容

本發明的目的是克服現有技術的不足，提供一種具有抗菌和抗病毒活性的卵黏蛋白液體制劑。

上述目的可以通過以下技術方案實現：

一種卵黏蛋白液體制劑，它含有下述重量百分比的成分：

所述輔助蛋白為溶菌酶和/或卵轉鐵蛋白。

優選地，所述卵黏蛋白液體制劑中還含有50～500mmol/L的鈣離子或10～500mmol/L鎂離子。

進一步優選地，所述卵黏蛋白液體制劑中含有50～200mmol/L的鈣離子或鎂離子。

優選地，所述輔助蛋白為溶菌酶和卵轉鐵蛋白，所述溶菌酶與卵轉鐵蛋白的重量比為1∶1。

優選地，所述氨基酸為賴氨酸和/或精氨酸。

優選地，所述多元醇為甘露醇和/或聚乙二醇。

一種卵黏蛋白液體制劑的制備方法，包括以下步驟：

1）將氨基酸溶解于pH值為6～8的緩沖液或水中，得到重量含量為1.5～4%的氨基酸溶液，再向氨基酸溶液中加入卵黏蛋白，使卵黏蛋白的重量含量為0.01～0.1%，攪拌至卵黏蛋白完全溶解；

2）繼續向步驟1）的溶液中加入輔助蛋白，使輔助蛋白的重量含量為0.001～0.01%，4℃下用50～100轉/分鐘的轉速攪拌，使其充分溶解；

3）最后加入多元醇，使多元醇的重量含量為0.5～5%，經0.45μm的無菌微濾膜過濾，即得，

所述輔助蛋白為溶菌酶和/或卵轉鐵蛋白。

優選地，還包括在步驟2）或3）中加入鈣離子或鎂離子，并使鈣離子的濃度達到50～500mmol/L或鎂離子的濃度達到10～500mmol/L的步驟。

優選地，所述氨基酸為賴氨酸和/或精氨酸。

優選地，所述多元醇為甘露醇和/或聚乙二醇。

本發明制得的卵黏蛋白液體制劑可以噴涂于食品表面、動物或人口鼻、創傷傷口等處，可以起到抵御微生物入侵、降低病毒活性與毒力的作用。

本發明制備的卵黏蛋白液體制劑對細菌具有很好的粘附性，對病毒具有很強的抵抗活性，制劑中卵黏蛋白濃度高，蛋白生物活性有效期長，能有效抵御微生物入侵、降低病毒活性與毒力，對H5N1和H1N1流感病毒具有一定的抑制作用。

具體實施方式

下面結合具體實施例對本發明作進一步的詳細描述。

實施例1?輔助蛋白對卵黏蛋白細菌粘附效果的影響

研究表明卵黏蛋白可通過黏附作用限制微生物的活動，進而對微生物的生長、增殖及毒性等起到抑制作用。在禽蛋蛋清中，天然狀態下卵黏蛋白與溶菌酶等其他蛋清蛋白質以聚合態的形式形成濃厚蛋白，為禽蛋提供了抵御微生物入侵的屏障。因此，本發明模擬天然狀態，研究不同的輔助蛋白對卵黏蛋白細菌粘附能力的影響。

在高純度卵黏蛋白中分別按照表1的比例加入不同種類和比例的輔助蛋白，制成蛋白的混合物，然后以大腸桿菌、沙門氏菌和金黃色葡萄球菌為對象，應用酶聯免疫吸附法(ELISA)測定不同蛋白混合物對細菌的粘附效果。