[發(fā)明專利]猴腎病毒40大T基因轉(zhuǎn)染構(gòu)建染色體易位細胞模型及其細胞庫

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310403921.8
• 申請日: 2013-09-01
• 公開（公告）號: CN104419666A
• 公開（公告）日: 2015-03-18
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 翁炳煥;黃荷鳳;徐晨明;李曉;趙永富;金昱
• 申請（專利權(quán)）人: 翁炳煥
• 主分類號: C12N5/10
• 分類號: C12N5/10;C12N15/85;C40B50/06;C40B40/02
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• 代理人: 暫無信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及猴腎病毒40大T基因(SV40LT抗原基因或SV40LT)介導(dǎo)(轉(zhuǎn)染)染色體易位細胞模型及其細胞庫的構(gòu)建，主要用于醫(yī)學(xué)細胞遺傳學(xué)研究領(lǐng)域，為染色體易位的研究提供細胞模型并保存其科研資源。

背景技術(shù)

染色體易位是染色體畸變的一種，一般指一條或數(shù)條染色體的一部份或整體轉(zhuǎn)移到另一條或數(shù)條染色體上，或指一條或數(shù)條染色體的一部份與另外一條或數(shù)條染色體的一部份發(fā)生互換。通常分為丟失遺傳物質(zhì)的不平衡易位和不丟失遺傳物質(zhì)的平衡易位。不平衡染色體易位的個體自身表現(xiàn)出相應(yīng)的染色體病臨床癥狀，平衡染色體易位的個體自身表現(xiàn)為“正常”，但在生育子代時易發(fā)生流產(chǎn)、死胎、不育，或生育相應(yīng)染色體病的子代。染色體病是目前無法治療的疾病，是先天性出生缺陷之一，一旦出生，就會給社會和家庭造成嚴重的心理負擔和精神痛苦，嚴重影響我國的人口質(zhì)量。

近年來有國外文獻報道，染色體易位是因為在細胞分裂前負責檢驗DNA損傷的機制不能嚴密運作所致。一些癌癥的早期也會出現(xiàn)染色體易位現(xiàn)象。以往的研究證實，慢性骨髓性白血病、前列腺癌等發(fā)病都與染色體易位有關(guān)。為何細胞在沒有排除染色體易位的情況下仍然繼續(xù)分裂?有報道推測，可能是在細胞分裂前負責檢驗DNA損傷的機制出錯，導(dǎo)致質(zhì)量不合格的染色體得以“蒙混過關(guān)”，結(jié)果造成了染色體易位。有學(xué)者利用這種檢驗機制對不能嚴密運作的人體細胞進行了實驗，向這些細胞中添加能切斷DNA的藥劑。實驗結(jié)果顯示，這些細胞在DNA未經(jīng)修復(fù)的情況下依然繼續(xù)分裂。實驗還發(fā)現(xiàn)，即使是極微小的DNA損傷，都能引起染色體易位。研究結(jié)果還揭示了染色體發(fā)生易位與環(huán)境、遺傳等多方面因素有關(guān)。

但是，由于沒有可在體外長期培養(yǎng)的、可用于發(fā)病機制研究的永生細胞模型及其細胞庫，就難以從細胞水平在體外研究染色體易位細胞受物理、化學(xué)、生物、遺傳等影響的基因突變、基因表達、功能改變、生理特性、生物傳導(dǎo)等機制，從而嚴重限制了染色體易位的進一步研究。

國外文獻報道，猴腎病毒40(SV40)可以使某些人類細胞發(fā)生永生化。Poul?in?DL、Kung?AL和Sullivan?CS等研究表明，SV40T抗原基因的導(dǎo)入能加快轉(zhuǎn)化細胞的生長速率，永生化細胞在體外多次傳代后，仍具有相對穩(wěn)定的增殖特性和功能狀態(tài)，同時也能保留其原始細胞的許多分化表型，可以用于轉(zhuǎn)基因動物模型及人類和動物某些種類的細胞模型的建立，據(jù)此可以借助于研究轉(zhuǎn)基因永生化細胞及動物模型而在體外研究原始細胞的特性，從而研究其發(fā)病機制。

根據(jù)文獻報道，Reilly用猿猴病毒(SV40)大T抗原基因轉(zhuǎn)化來建立血管平滑肌細胞株，構(gòu)建細胞模型以研究肝素對血管平滑肌的抑制作用機制。Su等利用經(jīng)SV40轉(zhuǎn)化的角化上皮細胞株，構(gòu)建細胞模型來分析上皮細胞內(nèi)蛋白質(zhì)合成的調(diào)控作用。Miquel等用SV40轉(zhuǎn)化的角化上皮細胞株，作為細胞模型研究層粘連蛋白5介導(dǎo)的細胞粘附作用。Webber等用經(jīng)SV40轉(zhuǎn)化的前列腺上皮細胞株作為細胞模型來研究前列腺上皮細胞的生理功能和分泌功能。Racusen等用經(jīng)Ad12-SV40轉(zhuǎn)化腎小管上皮細胞模型來研究近曲小管的損傷和疾病。Hougton等用SV40轉(zhuǎn)化建立骨髓基質(zhì)細胞株作為細胞模型以研究在一定培養(yǎng)條件下，細胞具有向脂肪細胞和成骨細胞的雙向分化的潛能，進一步研究骨質(zhì)疏松的機制。

因研究工作的需要，幾乎每種疾病都建立了各自的細胞模型。如糖尿病細胞模型、癌細胞細胞模型、轉(zhuǎn)基因細胞模型、絕經(jīng)期綜合癥細胞模型、子宮內(nèi)膜細胞模型、癲癇細胞模型、電子細胞模型、酒精性癡呆細胞模型、腦水腫細胞模型。等等。

但是，至今尚未見有關(guān)構(gòu)建可用于在體外從細胞水平研究染色體易位與環(huán)境等關(guān)聯(lián)因素所致的發(fā)病機制的永生細胞模型及其細胞庫的文獻報道，也無法開展相關(guān)的研究項目。為了解決上述問題，本發(fā)明人提出了本發(fā)明。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是要提供以SV40LT抗原基因介導(dǎo)染色體易位細胞模型及其細胞庫的構(gòu)建方法，另一目的是為在體外從細胞水平研究染色體易位的發(fā)病機制提供SV40LT抗原基因介導(dǎo)染色體易位細胞模型及其細胞庫。