[發明專利]一種阿托西班的純化方法

有效

• 申請號: 201310401394.7
• 申請日: 2013-09-05
• 公開（公告）號: CN103421092A
• 公開（公告）日: 2013-12-04
• 發明（設計）人: 路楊;楊東暉;周亮;沈柯
• 申請（專利權）人: 杭州諾泰制藥技術有限公司
• 主分類號: C07K7/16
• 分類號: C07K7/16;C07K1/18
• 代理公司: 北京華科聯合專利事務所 11130
• 代理人: 孟旭;王為

技術領域：

本發明涉及一種多肽類藥物的純化方法，特別涉及一種催產素競爭性拮抗劑阿托西班的純化方法。

背景技術：

阿托西班，英名為：Atosiban，為一種環狀多肽，結構式如下：

化學式如下：

c[Mpa-D-Tyr(OEt)-Ile-Thr-Asn-Cys]-Pro-Orn-Gly-NH2，

阿托西班是子宮內及蛻膜、胎膜上受體的環狀肽催產素競爭性拮抗劑，用于推遲不足月分娩。阿托西班可劑量相關性地抑制宮縮，并使環狀肽催產素介導的前列腺素分泌減少，達到保胎的目的，在中國，年出生率為2000萬，按目前臨床統計數字，約5-15％的孕婦需要進行保胎治療，按平均10％計，病人數量約為200萬。

阿托西班的制備方法很多，如固相合成法是用氨基樹脂與氨基酸羧基形成氨基酸的樹脂復合物，然后依次將下一個氨基酸連接到前一個氨基酸上，制備成線性多肽，再通過環化，裂解，純化得到阿托西班。有關阿托西班的純化方法也很多，專利文獻有：US20060148699A1，WO2006098707A，WO2011018745A1，CN102584953A，

現有技術中的純化方法主要采用色譜柱分離純化，如反相高效液相色譜法，HPLC色譜和離子交換色譜結合的方法等，中國專利(申請號：201210028890)公開了以三價鐵離子鹽作為還原劑對阿托西班粗肽溶液進行處理，除去其中的未氧化完全的雜質，之后利用高效液相色譜法純化阿托西班粗肽溶液，然后利用反相高效液相色譜將純化制得的阿托西班高氯酸鹽轉鹽制得阿托西班純品。

現有阿托西班的固相合成過程中，由于合成步驟較多，加入的原料數量較多，造成產物雜質種類比較多，已知的雜質包括：[Gly⁹-OH]-阿托西班、[Asp⁵-OH]-阿托西班、[D-Asn⁵]-阿托西班等，未知雜質還有很多。有關雜質中[Gly⁹-OH]-阿托西班，結構如下：

該雜質為毒性最大的雜質之一，而且極其不穩定，易變色，該雜質的存在嚴重影響阿托西班的色澤，含量以及使用安全。因此需要找到有效的方法將其去除并使其達到優質標準級別0.1%以下。本發明人研究發現，該雜質用現有技術的手段很難除去，有些方法雖可以去除部分，但去除效果不理想，難以達到優質標準級別同時容易造成阿托西班本身收率降低。為此，本發明人重點研究如何去除雜質[Gly⁹-OH]-阿托西班而不影響阿托西班的收率問題。

本發明人用現有的純化方法，對用固相合成法制備的阿托西班進行了純化，發現雜質[Gly⁹-OH]-阿托西班的含量均無法達到預訂目標0.1%。為此，本發明人對阿托西班的純化方法進行了研究，從而得到了本發明的技術方案。

發明內容：

本發明的目的是提供一種高收率、高純度以及低雜質的阿托西班的純化方法。本發明需要解決的技術問題是：選擇一種阿托西班的純化方法，解決(1)阿托西班成品純度不高，(2)阿托西班成品收率不高，(3)阿托西班與雜質[Gly⁹-OH]-阿托西班不能有效分離的問題。

本發明中一些常用的縮寫及術語具有以下含義；

Fmoc：芴甲氧羰基

Fmoc-AA：芴甲氧羰基保護的氨基酸

tBu：叔丁基

HoBt：1-羥基苯駢三唑

DIC：N，N′-二異丙基碳化二亞胺

MPa：巰基丙酸

D-Tyr(Et)：D-型的酪氨酸鏈用乙基保護

Ile：異亮氨酸

Thr：蘇氨酸

Asn：天門冬酰胺

Cys：半胱氨酸

Pro：脯氨酸

Orn：鳥氨酸

Gly：甘氨酸

Trt：三苯甲基

Et：乙基

Boc：叔丁氧羰基

DMF：N，N′-二甲基甲酰胺

Piperidine：六氫吡啶

Fmoc-Rink?Amide?Am?resin：用Fmoc保護的Rink氨甲基樹脂

TFA：三氟醋酸

TIS：三異丙基硅烷

MeOH：甲醇

DCM：二氯甲烷

PEG8000：聚乙二醇8000

Tris–HCl：三(羥甲基)氨基甲烷鹽酸鹽

HEPES：4-羥乙基哌嗪乙磺酸