[發明專利]一種新的耳聾相關基因突變檢測體系及試劑盒

在審

• 申請號: 201310397956.5
• 申請日: 2013-09-04
• 公開（公告）號: CN104419757A
• 公開（公告）日: 2015-03-18
• 發明（設計）人: 馮永;劉德遠;梅凌云;賀楚勝;劉亞蘭;蔣璐;陳紅勝;余鋒
• 申請（專利權）人: 中南大學湘雅醫院;天昊生物醫藥科技（蘇州）有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 上海申新律師事務所 31272
• 代理人: 劉懿

1.一種耳聾相關基因突變檢測體系，其特征在于：通過使用多重PCR引物及檢測探針檢測耳聾基因突變位點中是否存在突變，所述耳聾基因突變位點包括CEACAM16基因（NM_001039213.2）c.418A>C突變位點。

2.根據權利要求1所述的耳聾相關基因突變檢測體系，其特征在于：所述耳聾基因突變位點包括

共32個耳聾基因突變位點。

3.根據權利要求2所述的耳聾相關基因突變檢測體系，其特征在于，包括以下反應步驟：

1）將檢測樣本進行多重PCR反應；

2）多重PCR產物純化；

3）分型連接反應；

4）熒光檢測。

4.根據權利要求3所述的耳聾相關基因突變檢測體系，其特征在于：所述多重PCR反應包括

待測DNA樣本，

雙蒸餾水，

2xGC?I緩沖液，

2價鎂離子溶液，

脫氧核糖核苷三磷酸，

引物混合液，

熱穩定性的DNA聚合酶；

并進行PCR循環程序。

5.根據權利要求4所述的耳聾相關基因突變檢測體系，其特征在于：所述引物混合液為18對多重PCR引物，所述的引物對的序列如SEQ?ID?NO.:1至SEQ?ID?NO.:36所示。

6.根據權利要求3所述的耳聾相關基因突變檢測體系，其特征在于：所述多重PCR產物純化為在PCR產物中加入1酶單位的SAP酶和1酶單位的Exonuclease?I酶，溫浴后滅活。

7.根據權利要求3所述的耳聾相關基因突變檢測體系，其特征在于：所述分型連接反應包括

多重PCR產物，

10x連接酶緩沖液，

4xGC溶液，

Taq連接酶，

標記混合液，

PiMLDR混合液，

雙蒸餾水；

并進行循環反應。

8.根據權利要求7所述的耳聾相關基因突變檢測體系，其特征在于：所述PiMLDR混合液為32組檢測探針，每組檢測探針包含2條鑒別探針及1條通用探針，所述的檢測探針的序列如SEQ?ID?NO.:37至SEQ?ID?NO.:132所示。

9.一種耳聾相關基因突變檢測試劑盒，其特征在于，包括：

雙蒸餾水；

2xGC?I緩沖液；

2價鎂離子溶液；

脫氧核糖核苷三磷酸；

引物混合液；

熱穩定性的DNA聚合酶；

SAP酶；

Exonuclease?I酶；

10x連接酶緩沖液；

4xGC溶液；

Taq連接酶；

標記混合液；

PiMLDR混合液。