[發明專利]一種利用高速逆流色譜從蘇木中分離制備巴西木素和原蘇木素B的方法

無效

• 申請號: 201310393712.X
• 申請日: 2013-09-03
• 公開（公告）號: CN103450145A
• 公開（公告）日: 2013-12-18
• 發明（設計）人: 徐萍萍;關樹宏;果德安
• 申請（專利權）人: 中國科學院上海藥物研究所
• 主分類號: C07D313/20
• 分類號: C07D313/20;C07D311/94
• 代理公司: 濟南舜源專利事務所有限公司 37205
• 代理人: 苗峻

技術領域

本發明涉及天然藥物中分離化合物的方法，具體涉及一種利用高速逆流色譜從蘇木中分離制備巴西木素與原蘇木素B的方法。

背景技術

蘇木為傳統中藥，在我國有著悠久的藥用歷史，中國藥典收載蘇木為豆科植物蘇木（Caesalpinia?sappan?Lingum）的干燥心材，具有行血祛瘀，消腫止痛的作用。蘇木含有的化學成分主要有黃酮類、高異黃酮類、查耳酮類等成分。

巴西木素是一種天然媒介燃料，常用于蠶絲、毛皮和皮革的染色以及棉布的印花等方面；巴西木素與原蘇木素B是蘇木藥材中的主要大量成分，也是主要的活性成分。因此開發一種經濟、簡單、快捷的方法得到這兩個化學成分具有比較大的生產應用價值。

天然產物的分離大多采用柱色譜的方法進行分離，若從蘇木中采用柱色譜分離制備巴西木素與原蘇木素B，則需要多次反復分離，其不足有：（1）耗時比較長，經常要超過一個月；（2）需要使用大量的溶劑；（3）具有死吸附現象，樣品或多或少都會有損失；（4）勞動量比較大；（5）單次得到的樣品量較少，如果要得到10mg以上的樣品，要經過多次分離才行。

發明內容

本發明為解決傳統的柱色譜分離制備目標化合物過程中遇到的耗時長、溶劑消耗量大、勞動量大、樣品吸附嚴重、樣品損失等問題，本發明提供了一種利用高速逆流色譜從蘇木中分離制備巴西木素與原蘇木素B的方法，首先制備樣品溶液，然后采用高速逆流色譜儀聯用紫外檢測器進行分離制備，根據紫外圖譜分別收集含有目標組分巴西木素和原蘇木素B的流分。本發明采用高速逆流色譜法聯用紫外檢測器不需要使用固相載體，無不可逆吸附，能夠大大減少分離制備過程中使用的溶劑，其溶劑減少量在80%以上，分離時間至少節省5倍以上，收率提高50%以上，分離出的目標成分損失少，純度高，費用低，經濟環保。

本發明所述利用高速逆流色譜從蘇木中分離制備巴西木素與原蘇木素B的方法，首先制備樣品溶液，然后采用高速逆流色譜儀聯用紫外檢測器進行分離制備，根據紫外圖譜分別收集含有巴西木素和原蘇木素B的流分，然后用旋轉蒸發儀濃縮至干，分別得到最終產物巴西木素和原蘇木素B。所述目標成分巴西木素和原蘇木素B的定性是通過質譜結合核磁共振氫譜、碳譜確定的，其純度是利用HPLC分析得到的，其重量是通過在分析天平上稱量得到的。

本發明所述原蘇木素B和巴西木素的結構式如下：

所述高速逆流色譜采用的色譜條件為：溶劑體系為氯仿：甲醇：水的體積比為4:2-4:2，上相為固定相，下相為流動相；儀器轉速：采用順時針轉動，轉速為400~550轉/min，流動相流速為5.0~8.0?mL/min；水浴溫度：20℃-30℃；保留率：30%-80%；檢測波長：280nm。

除上述色譜條件外，其他條件均為現有設備常規條件。

這樣的色譜條件，能夠使得固定相的保留率在30%-80%之間，從而實現高效的分離；并且在保證分離效果的前提下，出峰最快，成本最低。

根據目標化合物巴西木素和原蘇木素B本身的理化性質并結合其紫外光譜掃描譜圖得到：所述紫外檢測時采用的紫外檢測波長為280nm。

具體步驟包括：

（1）溶劑體系的制備

將氯仿：甲醇：水以體積比為4:2-4:2的比例混合，靜置分層，上相為固定相，下相為流動相；

（2）樣品溶液的制備

將蘇木用2~5倍量的溶劑A熱回流提取1~5次，合并提取液，減壓濃縮至無溶劑A殘留得浸膏A，浸膏A用水完全分散，再用2~5倍量水的乙酸乙酯萃取浸膏A，乙酸乙酯層減壓濃縮至干后得浸膏B，上大孔吸附樹脂，使用5~20倍量的乙醇水溶液洗脫，洗脫液減壓濃縮至干，得浸膏C，即蘇木有效部位；然后將蘇木有效部位完全溶解于由體積比為1:1的流動相與固定相組成的溶劑中，得樣品溶液；

（3）分離制備巴西木素和原蘇木素B

取樣品溶液采用高速逆流色譜儀進行進樣，并根據紫外檢測器譜圖分別收集含有巴西木素和原蘇木素B的流分，然后用旋轉蒸發儀濃縮至干，分別得到最終產物巴西木素和原蘇木素B；

步驟（2）所述溶劑A為甲醇溶液或乙醇溶液。

本發明所述蘇木為市售藥材。

本發明所述倍量特指體積比。

步驟（2）所述5~20倍量的乙醇水溶液，其體積指的是相對于大孔吸附樹脂柱色譜的柱體積的5~20倍。