[發(fā)明專利]一種便于掃描電鏡觀察的簡易硅藻凈化處理方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310389793.6
• 申請日: 2013-09-02
• 公開（公告）號: CN103436449A
• 公開（公告）日: 2013-12-11
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 鄧湘云;李健保;蔣文凱;張國慶;劉鵬偉;王豐喜;景亞妮;白成英;楊杰
• 申請（專利權(quán)）人: 海南大學(xué)
• 主分類號: C12N1/12
• 分類號: C12N1/12
• 代理公司: 海口翔翔專利事務(wù)有限公司 46001
• 代理人: 李勇

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技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及微藻的凈化處理技術(shù)，具體地涉及水體硅藻的凈化處理技術(shù)，更具體地涉及一種便于掃描電鏡觀察的簡易硅藻凈化處理方法。

背景技術(shù)

硅藻是一類具有色素體的單細(xì)胞植物，全世界約有16000多種，體長在1μm到200μm之間，根據(jù)生存模式分為浮游和底棲兩大類，而根據(jù)形狀可分為中心硅藻綱和羽紋硅藻綱兩大類。硅藻分布極其廣泛，在條件適宜的情況下，只要有水的地方，一般都有硅藻的蹤跡。因?yàn)楣柙宸N類多、數(shù)量大，被稱為海洋的“草原”，其為地球提供大約20%的氧氣，并且可作為許多海洋生物的餌料。

硅藻的細(xì)胞壁由無定形二氧化硅和有機(jī)質(zhì)（主要是多肽和蛋白質(zhì)）構(gòu)成，故得名“硅藻”。硅藻細(xì)胞壁因種類和生存條件的不同，表現(xiàn)出精致而豐富的多級微納米孔隙和微結(jié)構(gòu)，且具有良好的機(jī)械強(qiáng)度、巨大的比表面積和多種光學(xué)特性。對硅藻部分、個體、種群和群體等不同層次的研究已經(jīng)在各領(lǐng)域展開，從而使硅藻在仿生合成、微納米器件、古氣候研究、生物監(jiān)測等方面有很好的應(yīng)用前景。

活體硅藻相比較硅藻土（硅藻化石），具有種類豐富、形體完整、可純化培養(yǎng)等優(yōu)勢，但是由于活體硅藻來源于不同水體，凈化和觀察比較困難。在現(xiàn)有的文獻(xiàn)檢索中發(fā)現(xiàn)，常用的硅藻凈化或提純方法都比較復(fù)雜，涉及到H₂O₂/HCl清洗、加熱、過濾、重液提取、凍干等步驟。盡管這些方法可達(dá)到較高的凈化要求，有機(jī)質(zhì)去除干凈，硅藻形態(tài)保持完好，但是僅用于硅藻的電鏡觀察和藻種鑒別，以上方法不僅操作繁瑣、耗時(shí)較長，而且涉及較多的化學(xué)試劑。

?????若能使硅藻殼體保有原有種屬硅藻的形貌和微觀結(jié)構(gòu)的前提下，實(shí)現(xiàn)硅藻的快速凈化，為硅藻的微觀形貌記錄和藻種鑒別提供極大幫助。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于針對現(xiàn)有技術(shù)的弊病，提供一種便于掃描電鏡觀察的簡易硅藻凈化處理方法，該方法采用酒精梯度脫水后置于鋁箔紙直接烘干的方法實(shí)現(xiàn)硅藻殼體的凈化，操作簡單、效率高、安全性高、耗時(shí)少、不對環(huán)境造成污染，能使硅藻殼體保有原有種屬硅藻的形貌和微觀結(jié)構(gòu)并且易于觀察。

為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明的技術(shù)方案為：一種便于掃描電鏡觀察的簡易硅藻凈化處理方法，包括以下步驟：

(1)用移液槍或膠頭滴管取5~15mL藻液放入離心管，在3000r/min～4000r/min轉(zhuǎn)速下離心3~5min，去除上清液，得到硅藻濃縮液A；

(2)向硅藻濃縮液A中添加質(zhì)量分?jǐn)?shù)為15%~30%的低濃度酒精至離心管2/3處，在3000r/min～4000r/min轉(zhuǎn)速下離心3~5min，去除上清液，得到硅藻濃縮液B；

(3)向硅藻濃縮液B中添加質(zhì)量分?jǐn)?shù)為40%~60%的中濃度酒精至離心管2/3處，在3000r/min～4000r/min轉(zhuǎn)速下離心3~5min，去除上清液，得到硅藻濃縮液C；

(4)向硅藻濃縮液C中添加質(zhì)量分?jǐn)?shù)為90%~100%的高濃度酒精至離心管2/3處，在3000r/min～4000r/min轉(zhuǎn)速下離心3~5min，去除上清液，得到硅藻濃縮液D；

(5)將裝有硅藻濃縮液D的離心管震蕩30s使硅藻充分分散，得到硅藻濃縮液E；

(6)將硅藻濃縮液E倒在鋁箔紙上，放入烘箱在90~130°C下烘10~15min，干燥后即可放入掃描電鏡觀察。

通過在場發(fā)射掃描電子顯微鏡下的觀察，采用本發(fā)明的方法分離提取出的硅藻保持原有種屬硅藻的形貌，并且微觀結(jié)構(gòu)清晰，無明顯的孔道堵塞現(xiàn)象。

本發(fā)明的從硅藻中分離提取硅藻殼體方法的優(yōu)點(diǎn)：

1、該方法通過采用梯度酒精高速離心去除硅藻殼周圍的雜質(zhì)組分，凈化效果好，且不易破壞原有種屬硅藻的形貌。

2、該方法將酒精溶液浸潤的硅藻殼置于鋁箔紙上，充分發(fā)揮了酒精蒸發(fā)速度快，硅藻吸附能力強(qiáng)的特點(diǎn)，在較短時(shí)間烘干后的硅藻有效地吸附在鋁箔紙上。

3、本發(fā)明具有操作簡單、耗時(shí)少、效率高、安全性高、不對環(huán)境造成污染，能使硅藻殼體保有原有種屬硅藻的形貌和微觀結(jié)構(gòu)的特點(diǎn)。

4、本發(fā)明從不同水樣中提取出不同形貌的硅藻殼體，為藻種觀察與鑒別提供了快捷的通道，為微納研究提供了新的素材，也將為人們探索硅藻的新性質(zhì)和新用途提供極大幫助。

具體實(shí)施方式

為了詳細(xì)說明本發(fā)明的方法的技術(shù)內(nèi)容，以下結(jié)合實(shí)施方式作進(jìn)一步說明。

實(shí)施例1：

(1)用移液槍或膠頭滴管取5mL藻液放入離心管，在3000r/min轉(zhuǎn)速下離心3min，去除上清液，得到硅藻濃縮液A；