[發(fā)明專利]人去唾液酸糖蛋白受體單克隆抗體及其制備和應(yīng)用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310382621.6
• 申請日: 2013-08-28
• 公開（公告）號: CN104418950A
• 公開（公告）日: 2015-03-18
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 殷正豐;李軍;張妤;錢海華;孫斌;陳磊
• 申請（專利權(quán)）人: 中國人民解放軍第二軍醫(yī)大學(xué)
• 主分類號: C07K16/18
• 分類號: C07K16/18;C12N5/20;A61K47/48;G01N33/68;G01N33/577;C12N5/09;C12R1/91
• 代理公司: 上海專利商標(biāo)事務(wù)所有限公司 31100
• 代理人: 陳靜

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種特異性地識別和結(jié)合人去唾液酸糖蛋白受體(Asialoglycoprotein?Receptor，ASGPR)胞外段的單克隆抗體、其制備方法及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

去唾液酸糖蛋白受體(asialoglycoprotein?receptor，ASGPR)，又稱肝凝集素或肝糖凝集蛋白，特異性表達(dá)于哺乳動物肝竇狀隙和基底外側(cè)的肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞表面，主要生理功能為清除外周血循環(huán)中含有D-半乳糖殘基或N-乙酰半乳糖胺殘基的糖蛋白、脂蛋白和凋亡細(xì)胞。ASGPR獨(dú)特的生理功能及其高度的肝細(xì)胞特異性，使其在肝細(xì)胞癌和轉(zhuǎn)移性肝癌的鑒別、循環(huán)肝癌細(xì)胞的分離和檢測、肝臟成像以及肝臟藥物或基因的靶向遞送等方面具有重要的基礎(chǔ)研究意義和潛在的臨床應(yīng)用價值。

近年來已有人利用ASGPR1全長基因[Trahtenherts?A,Benhar?I.An?internalizing?antibody?specific?for?the?human?asialoglycoprotein?receptor.Hybridoma(Larchmt),2009,28:225-233.]、ASGPR大亞基異構(gòu)體蛋白H1b[劉嘉,丁紅暉,楊燕,胡斌,余源,黃紅平,等.抗人ASGPR大亞基異構(gòu)體蛋白H1b多克隆抗體的制備和鑒定.細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志,2009,10:917-919.]、ASGPR大亞基糖識別區(qū)基因[Zhao?X,Yu?Z,Dai?W,Yao?Z,Zhou?w,Cao?L,et?al.Construction?and?functional?characterization?of?an?anti-asialoglycoprotein?receptor?single-chain?variable-fragment-targeted?melittin.Biotechnol?Appl?Biochem,2011,58:405-411.]、ASGPR基因片段[Park?JH,Kim?KL,Cho?EW.Detection?of?surface?asialoglycoprotein?receptor?in?hepatic?and?extra-hepatic?cells?using?a?novel?monoclonal?antibody.Biotechnol?Lett,2006,28:1061-1069.]等制備ASGPR抗體。遺憾的是，只是在近期唯有Santa公司的單克隆抗體可以商購到[美國santa?cruz生物公司，http://www.scbt.com/table-asgpr.html]，且僅有一款針對ASGPR1全長序列的小鼠單克隆抗體[sc-52623]。然而，關(guān)于這些抗體的應(yīng)用研究鮮見報(bào)道。而Santa公司出售的抗體適用范圍有限，無法滿足臨床應(yīng)用的需要。

因此，本領(lǐng)域有必要進(jìn)一步開發(fā)特異性良好的ASGPR單克隆抗體，以期實(shí)現(xiàn)ASGPR應(yīng)用價值的臨床轉(zhuǎn)化。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供人去唾液酸糖蛋白受體單克隆抗體及其制備和應(yīng)用。

在本發(fā)明的第一方面，提供一種單克隆抗體，其是由保藏號為CCTCC?NO:C201370的雜交瘤細(xì)胞株分泌的單克隆抗體。

在一個優(yōu)選例中，所述的單克隆抗體是免疫球蛋白同種型IgG1型。

在另一優(yōu)選例中，所述的單克隆抗體以SEQ?ID?NO:1所示的抗原免疫動物制備獲得。

在本發(fā)明的另一方面，提供一種雜交瘤細(xì)胞株，其在中國典型培養(yǎng)物保藏中心的保藏號是CCTCC?NO:C201370。

在本發(fā)明的另一方面，提供一種免疫偶聯(lián)物，所述免疫偶聯(lián)物包括：所述的單克隆抗體以及與之連接的標(biāo)記物；所述的標(biāo)記物選自(但不限于)：辣根過氧化物酶、堿性磷酸酶、生物素或熒光素。

在本發(fā)明的另一方面，提供一種檢測試劑盒，其中包括：

所述的單克隆抗體；或

所述的雜交瘤細(xì)胞株；或

所述的免疫偶聯(lián)物。

在一個優(yōu)選例中，所述的試劑盒中還包括：

第二抗體，所述的第二抗體特異性識別所述的單克隆抗體；

免疫磁珠；

顯色劑；

洗滌液；和/或

終止液。

在本發(fā)明的另一方面，提供所述的單克隆抗體的用途，用于制備特異性檢測人去唾液酸糖蛋白受體的檢測試劑或試劑盒。

在一個優(yōu)選例中，所述的檢測人去唾液酸糖蛋白受體包括：(1)定性檢測人去唾液酸糖蛋白受體；或(2)定量檢測人去唾液酸糖蛋白受體。