[發明專利]用于生產人纖維蛋白原的增溶工藝有效

申請號：	201310382426.3	申請日：	2013-08-28
公開（公告）號：	CN103405754A	公開（公告）日：	2013-11-27
發明（設計）人：	徐建生;王玉兵;田健生;梁華;肖雷	申請（專利權）人：	武漢中原瑞德生物制品有限責任公司
主分類號：	A61K38/36	分類號：	A61K38/36;A61K9/19;A61K47/18;A61K47/26;C07K14/75;C07K1/36;C07K1/30;C07K1/16;A61P7/04;A61P1/16
代理公司：	湖北武漢永嘉專利代理有限公司 42102	代理人：	崔友明
地址：	430223 湖北省武***	國省代碼：	湖北;42
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摘要：
搜索關鍵詞：	用于生產纖維蛋白原工藝
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【說明書】：

技術領域

本發明涉及血液制品領域，特別涉及一種用于生產人纖維蛋白原的增溶工藝。?

背景技術

人纖維蛋白原主要由肝臟合成，人體含量約為2.5～4.0g/L左右，大部分存在于人體血漿中，僅有不到20%存在于血管外。主要用于先天性、獲得性纖維蛋白原減少癥、嚴重肝臟損傷、肝硬化、DIC以及手術或者產后大出血等的治療，是臨床上用于大出血止血的必備急救藥品之一。目前生產人纖維蛋白原主要有兩種方法：一種是以血漿離心上清液經低溫乙醇分離，生產出的組分I為原料，制得成品，但該工藝主要存在純度不高的問題，生產出來的制品純度都在80%以下，產品雜質含量偏多，患者在注射使用時，容易發生不良反應；一種是以冷沉淀為原料，通過抽提、吸附、離心、層析等制造工藝得到，采用冷沉淀為原料，通過抽提、吸附、離心、層析等制造工藝得到的人纖維蛋白原沉淀溶解性低（該法得到的成品溶解度低），溶解困難。通過添加聚山梨酯80可以達到增強纖維蛋白原在溶解液中的溶解性，提高制品的質量、純度和最終收率的目的。通過添加聚山梨酯80可以增強纖維蛋白原在溶解液中的溶解性，達到提高制品的質量、純度和最終收率的目的。?

聚山梨酯80，化學名為聚氧乙烯20山梨醇酐單油酸酯，為淡黃色至橙黃色的粘稠液體。易溶于水、甲醇、乙醇和醋酸乙酯，在礦物油中極微溶解，屬于親水型非離子表面活性劑，為藥物制劑中常用的輔料之一。由于其結構中具有較長的碳鏈結構，對親脂性藥物有較好的助溶作用，在制備難溶性藥物制劑時，常用作助溶劑、乳化劑和穩定劑等。?

發明內容

本發明要解決的技術問題是提供一種純度高，溶解性好，穩定性高，滅活病毒效果好的生產人纖維蛋白原的増溶工藝。?

為解決上述技術問題，本發明采用如下技術方案：用于生產人纖維蛋白原的增溶工藝，主要步驟如下：?

（1）原料血漿處理：將原料血漿在5000～20000rpm的速度下進行連續離心分離，得到冷沉淀；?

（2）冷沉淀溶解、離心：在每公斤步驟1)所得的冷沉淀中加入3～8L注射用水，所得溶解液加熱至20～40℃，攪拌使沉淀完全溶解，將其pH值調節到6.6～7.4，加入氫氧化鋁凝膠，然后以5000～20000rmp的速度進行連續離心分離，離心所得上清液用潔凈過濾器進行潔凈過濾；?

（3）病毒滅活：添加吐溫80和磷酸三丁酯（TNBP），將所得液體在專用的病毒滅活罐內，以40～l00rmp低速攪拌，在24～26℃條件下保溫6～8小時；?

（4）層析精制：在步驟（3)所得的溶液中加入枸櫞酸鈉、氯化鈉、甘氨酸緩沖液，通過凝膠層析柱進行吸附，經層析柱流出來的液體另行收集，用于人纖維蛋白原的制造；?

（5）離心分離：在步驟（4）所收集的液體中添加甘氨酸，待甘氨酸充分溶解完全后，將溶液冷卻至0～10℃，用離心機對其以5000～20000rmp的速度進行連續離心分離，得到人纖維蛋白原沉淀；?

（6）沉淀溶解：對步驟（5）所得沉淀加入聚山梨酯80進行溶解，得到溶解液；?

（7）除菌過濾：使用滅菌好的過濾器對步驟（6)所得的液體進行除菌過濾；?

（8）分裝、凍干：對步驟（7)所得的液體進行分裝，然后進行凍干，凍干時間為4～8天，凍干前先使凍干機急速凍結至-40℃以下，注意凍干過程前后和整個過程中，制品的溫度不能超過35℃，凍干后制品在真空狀態下完全密閉膠塞，在凍干機內部注入無菌空氣，使壓力達到平衡。?

按上述方案，步驟（2）中按每公斤冷沉淀加入100～110g氫氧化鋁凝膠。?