[發明專利]用于生產人纖維蛋白原的增溶工藝

有效

• 申請號: 201310382426.3
• 申請日: 2013-08-28
• 公開（公告）號: CN103405754A
• 公開（公告）日: 2013-11-27
• 發明（設計）人: 徐建生;王玉兵;田健生;梁華;肖雷
• 申請（專利權）人: 武漢中原瑞德生物制品有限責任公司
• 主分類號: A61K38/36
• 分類號: A61K38/36;A61K9/19;A61K47/18;A61K47/26;C07K14/75;C07K1/36;C07K1/30;C07K1/16;A61P7/04;A61P1/16
• 代理公司: 湖北武漢永嘉專利代理有限公司 42102
• 代理人: 崔友明

1.用于生產人纖維蛋白原的增溶工藝，主要步驟如下：

（1）原料血漿處理：將原料血漿在5000～20000rpm的速度下進行連續離心分離，得到冷沉淀；

（2）冷沉淀溶解、離心：在每公斤步驟1)所得的冷沉淀中加入3～8L注射用水，所得溶解液加熱至20～40℃，攪拌使沉淀完全溶解，將其pH值調節到6.6～7.4，加入氫氧化鋁凝膠，然后以5000～20000rmp的速度進行連續離心分離，離心所得上清液用潔凈過濾器進行潔凈過濾；

（3）病毒滅活：添加吐溫80和磷酸三丁酯，將所得液體在專用的病毒滅活罐內，以40～l00rmp低速攪拌，在24～26℃條件下保溫6～8小時；

（4）層析精制：在步驟（3)所得的溶液中加入枸櫞酸鈉、氯化鈉、甘氨酸緩沖液，通過凝膠層析柱進行吸附，經層析柱流出來的液體另行收集，用于人纖維蛋白原的制造；

（5）離心分離：在步驟（4）所收集的液體中添加甘氨酸，待甘氨酸充分溶解完全后，將溶液冷卻至0～10℃，用離心機對其以5000～20000rmp的速度進行連續離心分離，得到人纖維蛋白原沉淀；

（6）沉淀溶解：對步驟（5）所得沉淀加入吐溫80進行溶解，得到溶解液；

（7）除菌過濾：使用滅菌好的過濾器對步驟（6)所得的液體進行除菌過濾；

（8）分裝、凍干：對步驟（7)所得的液體進行分裝，然后進行凍干，凍干時間為4～8天，凍干前先使凍干機急速凍結至-40℃以下，注意凍干過程前后和整個過程中，制品的溫度不能超過35℃，凍干后制品在真空狀態下完全密閉膠塞，在凍干機內部注入無菌空氣，使壓力達到平衡。

2.如權利要求1所述的用于生產人纖維蛋白原的增溶工藝，其特征在于步驟（2）中按每公斤冷沉淀加入100～110g氫氧化鋁凝膠。

3.如權利要求1或2所述的用于生產人纖維蛋白原的增溶工藝，其特征在于步驟（4）枸櫞酸鈉、氯化鈉、甘氨酸緩沖液配制比例為7:5:18。

4.如權利要求1或2所述的用于生產人纖維蛋白原的增溶工藝，其特征在于步驟（5)中在0～4℃的條件下進行離心。

5.如權利要求1或2所述的用于生產人纖維蛋白原的增溶工藝，其特征在于步驟（6）所述的沉淀溶解的具體步驟是：在每公斤步驟（5）所得沉淀物中加入5～10L注射用水，按每升溶解水加入12～15g枸櫞酸鈉、20～30g鹽酸精氨酸、3～10g氯化鈉、10-15g甘氨酸，調節pH6.8～7.4，升溫30～40℃。

6.如權利要求5所述的用于生產人纖維蛋白原的增溶工藝，其特征在于在步驟（6）所得溶解液中加入吐溫80，其用量為30～50μg/ml溶解液。

7.如權利要求1或2所述的用于生產人纖維蛋白原的增溶工藝，其特征在于在步驟（3）使溶液中吐溫80的最終濃度為1%，磷酸三丁酯最終濃度為0.3%。

8.如權利要求3所述的用于生產人纖維蛋白原的增溶工藝，其特征在于在步驟（5）使所得混合溶液中甘氨酸的濃度為3mol/L。