[發(fā)明專利]自噬抑制劑在制備腫瘤多藥耐藥逆轉(zhuǎn)劑中的應(yīng)用

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310380007.6
• 申請日: 2013-08-27
• 公開（公告）號: CN103505458A
• 公開（公告）日: 2014-01-15
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 韓衛(wèi)東;潘宏銘
• 申請（專利權(quán)）人: 浙江大學(xué)
• 主分類號: A61K31/4706
• 分類號: A61K31/4706;A61P35/00
• 代理公司: 杭州天正專利事務(wù)所有限公司 33201
• 代理人: 黃美娟;冷紅梅

（一）技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及自自噬抑制劑在制備腫瘤多藥耐藥逆轉(zhuǎn)劑中的應(yīng)用。

（二）背景技術(shù)

肺癌已成為發(fā)病率和死亡率增長最快，嚴(yán)重危害人類健康和生命的惡性腫瘤之一，多數(shù)患者確診時已屬晚期，因此化療仍是肺癌的主要治療方法。但10多年來化療的療效并未獲得突破性進(jìn)展，靶向治療的出現(xiàn)，讓肺癌病人獲得了新的希望。表皮生長因子受體酪氨酸激酶抑制劑在肺癌的治療中取得了巨大的成功，其代表藥物為吉非替尼及埃羅替尼。這兩類分子靶向藥物都已在臨床上廣泛地使用，成為非小細(xì)胞肺癌的重要治療藥物，但是由于該類靶向藥物價格昂貴，且有不少患者治療一開始即對這類藥物不敏感，或者有些患者對該類藥物初始有效但很快產(chǎn)生耐藥，患者在接受治療的不同時期內(nèi)出現(xiàn)對EGFR抑制劑不同程度的耐藥現(xiàn)象，從而使得該類治療藥物的臨床使用受到很大的限制。因此，提高EGFR抑制劑治療敏感性方法顯得尤為重要。

目前發(fā)現(xiàn)EGFR抑制劑耐藥的機(jī)制主要包括以下幾個方面：EGFR激酶區(qū)域特異性繼發(fā)突變；酪氨酸受體高表達(dá)，下游效應(yīng)蛋白活化；非依賴于EGFR的血管生成增加；下游區(qū)介質(zhì)活化，信號途徑異常激活，如其中可能與自噬作用密切相關(guān)的PI3K-Akt信號通路的異常激活。III型PI3K家族成員屬于原癌基因，其與蛋白激酶B(Akt)組成的PI3K-Akt信號通路，在細(xì)胞的增殖和存活中起著重要的作用。PI3K激活可導(dǎo)致Akt的完全活化，激活的Akt再通過磷酸化作用激活或抑制其下游靶蛋白，在細(xì)胞內(nèi)發(fā)揮著抑制凋亡、促進(jìn)增殖的作用。PI3K組成性活化在EGFR耐藥的發(fā)展和維持中起到關(guān)鍵作用。PI3K組成性活化的原因有：基因擴(kuò)增、下游效應(yīng)蛋白過度表達(dá)（如Akt蛋白），以及PTEN丟失或失活。Kokubo等的研究顯示EGFR抑制劑耐藥的亞組人群的Akt磷酸化表達(dá)增加，PTEN蛋白表達(dá)減少，而PTEN的再引入或PI3K-Akt途徑激活的藥理學(xué)下調(diào)可以作為治療耐藥的一種方案。Qin等報道Ras和Src活化可以通過激活A(yù)kt和/或Erk信號途徑而導(dǎo)致細(xì)胞對EFGR抑制劑耐藥。

細(xì)胞自噬是依賴溶酶體途徑對細(xì)胞內(nèi)蛋白和細(xì)胞器進(jìn)行降解的一種過程，以胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)雙層膜結(jié)構(gòu)包裹部分胞質(zhì)和細(xì)胞器的自噬體為特征，自噬過程由一系列基因控制，其中關(guān)鍵的基因包括LC3和ATG7等。許多化療藥物可以引起腫瘤細(xì)胞自噬，在某些情況下，自噬的持續(xù)激活最終會導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞自噬性死亡，但相反，適度的自噬在大多情況下可以幫助腫瘤細(xì)胞面對各種死亡刺激，此時自噬表現(xiàn)為一種腫瘤細(xì)胞自我調(diào)整的生存方式，所以自噬在腫瘤治療中的作用存在兩面性。

（三）發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明目的是提供自噬抑制劑在制備腫瘤多藥耐藥逆轉(zhuǎn)劑中的應(yīng)用。在此基礎(chǔ)上提出一種新的增敏肺癌靶向治療方法，即EGFR-TKI聯(lián)合抑制自噬的方法。

本發(fā)明采用的技術(shù)方案是：

自噬抑制劑在制備腫瘤多藥耐藥逆轉(zhuǎn)劑中的應(yīng)用。

具體的，所述自噬抑制劑用于逆轉(zhuǎn)表皮生長因子受體酪氨酸激酶抑制劑引起的多藥耐藥。

發(fā)明人用EGFR-TKIs吉非替尼及埃羅替尼處理肺癌細(xì)胞系A(chǔ)549、H1299等細(xì)胞后，從形態(tài)學(xué)及分子生物學(xué)水平觀察藥物處理后細(xì)胞內(nèi)的自噬現(xiàn)象，用免疫印跡的方法檢測自噬相關(guān)的信號通路，揭示其誘導(dǎo)肺癌細(xì)胞自噬的分子機(jī)理。再使用小分子抑制劑或者小RNA干擾自噬必需基因的方法抑制肺癌細(xì)胞自噬，證實抑制自噬可以增加肺癌細(xì)胞對于EGFR-TKI的敏感性。

優(yōu)選的，所述自噬抑制劑為氯喹。

優(yōu)選的，所述表皮生長因子受體酪氨酸激酶抑制劑為吉非替尼或埃羅替尼。

本發(fā)明的有益效果主要體現(xiàn)在：本發(fā)明提供了自噬抑制劑在制備腫瘤多藥耐藥逆轉(zhuǎn)劑中的應(yīng)用，該自噬抑制劑可有效增加肺癌細(xì)胞對于EGFR靶向藥物的敏感性，對臨床有著重要的借鑒價值，在通過藥物治療誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡的同時輔以自噬作用的抑制劑，可能將會增加人類癌癥治療的成功率。

（四）附圖說明

圖1為EGFR-TKIs呈濃度（A）和時間（B）依賴性地誘導(dǎo)肺癌細(xì)胞LC3-II表達(dá)。

圖2為吉非替尼誘導(dǎo)肺癌細(xì)胞內(nèi)自噬溶酶體形成。圖中綠色熒光信號表示自噬標(biāo)志蛋白LC3-II（LC3），紅色熒光信號為標(biāo)記的溶酶體（Lysosome），綠色與紅色信號共定位后出現(xiàn)的黃色信號表示自噬溶酶體（Merge）。

圖3為透射電鏡顯示吉非替尼或者埃羅替尼可以誘導(dǎo)肺癌細(xì)胞系A(chǔ)549細(xì)胞內(nèi)自噬體的形成。A：對照細(xì)胞；B、C：吉非替尼處理細(xì)胞；D、E：埃羅替尼處理細(xì)胞。圖中白色箭頭為典型的自噬體及自噬溶酶體。