[發明專利]一種大型真菌去甲基化育種方法及裝置

有效

• 申請號: 201310377815.7
• 申請日: 2013-08-27
• 公開（公告）號: CN103460993A
• 公開（公告）日: 2013-12-25
• 發明（設計）人: 朱巍巍;李莉;池景良;趙新海;張慶華;關艷麗;鐘麗娟
• 申請（專利權）人: 遼寧省微生物科學研究院
• 主分類號: A01G1/04
• 分類號: A01G1/04
• 代理公司: 錦州遼西專利事務所 21225
• 代理人: 李輝

1.一種大型真菌去甲基化育種方法，其特征是：

具體步驟是：

1.1、采用去甲基化育種大型真菌的裝置，有培養皿主體和與該培養皿主體配合使用的培養皿蓋，所述培養皿主體包括底盤和自底盤邊緣向上延伸圍成一圈的側壁，所述培養皿主體內設有至少一個與側壁形成同心環的環形隔板將培養皿主體由內至外分隔成獨立的培養區域；培養皿主體的中心區域為單純培養基區域，加入培養基A；與培養皿主體的中心區域相鄰的誘變區域及連續的其他誘變區域，加入培養基A和抑制劑B；所述培養基A為瓊脂培養基，所述抑制劑B為小分子化學抑制劑，所述小分子化學抑制劑為核苷類DNA甲基轉移酶抑制劑或非核苷類DNA甲基轉移酶抑制劑；

1.2、將待誘變菌株接種于培養皿的單純培養基區域，在適生長條件下進行倒置培養；

1.3、中心區域的待誘變菌株菌絲生長進入鄰近的誘變區域，抑制劑進入生長菌絲產生作用；?

1.4、獲得誘變菌株。

2.根據權利要求1所述的大型真菌去甲基化育種方法，其特征是：所述獨立誘變區域還加入指示劑C、輔助劑D中的至少一種，所述指示劑C為酸堿指示劑，在明確目的性誘變育種時添加，針對誘變目的物設計加入的指示劑成分；所述輔助劑D為菌株細胞壁通透性增強成分。

3.根據權利要求1所述的大型真菌去甲基化育種方法，其特征是：所述核苷類DNA甲基轉移酶抑制劑為5-氮雜胞苷、5-氮-2’-脫氧胞苷、5-氟脫氧胞苷及脫氧胞苷衍生物中的一種，所述非核苷類DNA甲基轉移酶抑制劑為聚苯復合物、4-氨基苯酸衍生物中的一種。

4.根據權利要求1所述的大型真菌去甲基化育種方法，其特征是：所述待誘變菌株為大型真菌，所述培養基A為馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養基、麥粒瓊脂培養基、麥芽酵母蛋白胨瓊脂培養基、木屑麩皮蔗糖瓊脂培養基中的一種。

5.根據權利要求2所述的大型真菌去甲基化育種方法，其特征是：所述指示劑C為酚紅、甲基紅、特異基團顯色劑中的至少一種；所述輔助劑D為二甲基亞砜或溶菌酶。

6.根據權利要求1所述的大型真菌去甲基化育種方法，其特征是：所述環形隔板的數目≥2個，環形隔板分隔的誘變區域中抑制劑B濃度由內至外遞增，抑制劑濃度不夠未產生誘變，菌絲自由生長進入相鄰更高抑制劑濃度的誘變區，直至發生誘變。

7.一種大型真菌去甲基化育種裝置，有培養皿主體和與該培養皿主體配合使用的培養皿蓋，所述培養皿主體包括底盤和自底盤邊緣向上延伸圍成一圈的側壁，其特征是：所述培養皿主體內設有至少一個與側壁形成同心環的環形隔板。

8.根據權利要求7所述的大型真菌去甲基化育種裝置，其特征是：所述環形隔板的數目≥2個，所述環形隔板高度相等。

9.根據權利要求7所述的大型真菌去甲基化育種裝置，其特征是：所述環形隔板的數目≥2個，所述環形隔板高度由內部環形隔板到外部環形隔板呈階梯遞增或遞減。

10.根據權利要求7所述的大型真菌去甲基化育種裝置，其特征是：所述環形隔板的數目為2個，將培養皿主體由內至外分隔成獨立的培養區Ⅰ、培養區Ⅱ、培養區Ⅲ。