[發(fā)明專(zhuān)利]一種云芝糖肽高效制備的方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310375516.X
• 申請(qǐng)日: 2013-08-27
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN103408645A
• 公開(kāi)（公告）日: 2013-11-27
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 許波;賀玉榮
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 北京貫虹科技集團(tuán)有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): C07K14/375
• 分類(lèi)號(hào): C07K14/375;C07K1/36;C07K1/30;C07K1/34
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

一、技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，涉及到一種云芝糖肽高效制備的方法。

二、背景技術(shù)

云芝[Coriolus?versicolor]，又稱(chēng)千層蘑、彩紋云芝、多色云芝、采絨革蓋菌等，隸屬于真菌門(mén)(Mycology)、擔(dān)子菌亞門(mén)(Basidiomycotina)、多孔菌科(Polyporales)、栓菌屬(Trametes)。曾用名：Polystictuis?Versicolor(L)Fr。

云芝糖肽(Polysacchride?Peptide?of?Coriolus?versicolor，簡(jiǎn)稱(chēng)PSP)是從中國(guó)云芝擔(dān)子菌綱多孔菌科中的一些屬、種中提取的一種蛋白多糖類(lèi)物質(zhì)，是良好的生物效應(yīng)劑，適用于食管癌、胃癌等癌癥的治療，具有免疫調(diào)節(jié)作用，對(duì)腫瘤患者的細(xì)胞免疫功能和血液系統(tǒng)有一定保護(hù)作用，可提高患者的生活質(zhì)量。在近期的研究中人們又發(fā)現(xiàn)它具有抗艾滋病毒活性，近十幾年來(lái)它引起了人們?cè)絹?lái)越大的興趣，成為了很有潛力的抗癌藥物。

云芝糖肽最早是由日本從211種擔(dān)子菌中篩選出的云芝里提取獲得的，經(jīng)過(guò)21年的研究，于1981年在美國(guó)獲得專(zhuān)利，是一種新型的生物反應(yīng)調(diào)節(jié)劑類(lèi)藥物，命名為polysaccharides?K，簡(jiǎn)稱(chēng)：PSK，在當(dāng)時(shí)引起了整個(gè)醫(yī)藥界廣泛的興趣。目前，云芝糖肽既可由云芝子實(shí)體中提取，也可通過(guò)液體發(fā)酵的方法從云芝菌絲體中提取獲得，現(xiàn)大都采用后種提取方法。日本是最先提取獲得云芝糖肽的國(guó)家，他們采用靜置培養(yǎng)法培養(yǎng)菌膜，并用勻漿機(jī)將菌膜打碎，以制備發(fā)酵種子。在提取工藝上，日本先用NaOH在95-98℃的溫度下堿提3個(gè)小時(shí)，后用5kd濾膜超濾，以除去小分子成分，再用硫酸銨鹽析，噴霧干燥以后得到云芝糖肽。

自從云芝糖肽的分離后，國(guó)內(nèi)外學(xué)者從體內(nèi)到體外都進(jìn)行了大量的實(shí)驗(yàn)，目前云芝糖肽已被定位為生物學(xué)應(yīng)答調(diào)節(jié)劑，在體內(nèi)，能增加γ-IFN，IL-2的分泌和促進(jìn)T細(xì)胞的增殖，調(diào)節(jié)體液免疫和細(xì)胞免疫功能，同時(shí)，能中和環(huán)磷酰胺等化療藥物對(duì)白細(xì)胞和IL-2的抑制作用并且推遲超敏反應(yīng)，并對(duì)于體內(nèi)的抗腫瘤細(xì)胞的增殖活性已得到很好的證明。PSP目前臨床上主要應(yīng)用于放療、化療及手術(shù)治療后的聯(lián)合治療，能緩解腫瘤患者免疫功能下降的狀況，同時(shí)應(yīng)用于抗HBV及HCV等病毒感染的輔助治療，有助于調(diào)節(jié)患者的免疫狀態(tài)。

而當(dāng)今云芝發(fā)酵生產(chǎn)云芝糖肽的過(guò)程中，存在著投入較大，成本較高，而云芝糖肽的收率較低，經(jīng)濟(jì)效益不高等問(wèn)題，阻礙了產(chǎn)品的發(fā)展。

三、發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提出高效制備云芝糖肽的一種工藝，依此法可以有效提高云芝糖肽的產(chǎn)量和產(chǎn)品純度，提高產(chǎn)率，降低生產(chǎn)成本。

一種云芝糖肽高效制備的方法，主要通過(guò)如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)：

(1)堿液提取發(fā)酵菌絲體獲得云芝糖肽的菌絲體提取液

微生物發(fā)酵后獲得菌絲體烘干，研細(xì)，精密稱(chēng)定，按比例加入堿液，提取數(shù)次后，離心獲得云芝糖肽初提液。

(2)冷熱堿提取菌絲體殘?jiān)@得云芝糖肽菌絲體殘?jiān)崛∫?/p>

菌絲體殘?jiān)娓桑屑?xì)，精密稱(chēng)定，按比例加入堿液，常溫下提取，離心獲得部分提取液，堿提后殘?jiān)幢壤尤雺A液，高溫提取，離心后合并提取液獲得菌絲體殘?jiān)崛∫骸?/p>

(3)從云芝糖肽提取液中制備獲得云芝糖肽

堿提獲得菌絲體提取液及菌絲體殘?jiān)崛∫夯旌希瑴p壓濃縮至約原體積的1/5，加入HCl中和；中和處理后提取液同菌株發(fā)酵上清液合并，減壓濃縮約至原體積的1/5，將濃縮液移至透析袋中流水透析72小時(shí)；緩慢加入4倍體積95％乙醇，攪拌均勻，4℃下靜置12h，倒出上清液，取沉淀，分別用95％乙醇和丙酮洗滌，70℃真空干燥，即得到云芝糖肽，得率高于10.50g/L以上。

四、本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)

(1)本發(fā)明對(duì)云芝糖肽的提取工藝進(jìn)行了深入研究，既用水提醇沉法提取了發(fā)酵液中的胞外糖肽，又分別通過(guò)水提、堿提的方法來(lái)處理菌絲體，獲取胞內(nèi)糖肽類(lèi)物質(zhì)，并對(duì)水提后的菌絲體殘?jiān)僖来斡美鋲A和熱堿進(jìn)行提取，有效提高了云芝糖肽的得率；

(2)本發(fā)明脫色工藝中用樹(shù)脂法取代傳統(tǒng)的活性炭和雙氧水脫色的方法，具有脫色時(shí)間短、多糖損失小、脫色效率高、易分離等優(yōu)點(diǎn)，可有效提高云芝糖肽的色澤和質(zhì)量；

(3)本發(fā)明提供的一種云芝糖肽的制備工藝具有技術(shù)先進(jìn)、工藝簡(jiǎn)單、產(chǎn)率高、成本低、產(chǎn)品純度高等優(yōu)點(diǎn)，有利于我國(guó)云芝糖肽生產(chǎn)技術(shù)和產(chǎn)業(yè)化水平的提高。

五、附圖說(shuō)明