[發明專利]基于20個多重插入缺失遺傳標記的法醫學復合檢測試劑盒

有效

• 申請號: 201310372860.3
• 申請日: 2013-08-23
• 公開（公告）號: CN103468800A
• 公開（公告）日: 2013-12-25
• 發明（設計）人: 侯一平;黃健;顏靜;羅海玻;魏蔚;張霽;云利兵;李英碧
• 申請（專利權）人: 四川大學
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 成都虹橋專利事務所(普通合伙) 51124
• 代理人: 梁鑫

技術領域

本發明屬于法醫遺傳學應用領域，具體涉及基于20個多重插入缺失遺傳標記的法醫學復合檢測試劑盒。

背景技術

法醫遺傳學通過對生物性檢材進行DNA遺傳標記的檢測來實現親子鑒定和個人識別。插入缺失多態性遺傳標記(insertion/delection?polymorphism，Indels)是由人類基因組單點突變產生，即基因組中特定堿基位置一定數量的核苷酸插入或缺失，造成DNA片段長度變化形成的多態性遺傳標記。它在人類基因組中分布廣泛，其分布密度僅次于單核苷酸多態性(single?nucleotide?polymorphism，SNPs)。Indels和SNPs同屬二等位基因多態性遺傳標記，并且同樣具有遺傳穩定、突變率低、擴增片段小的特點，在幫助解決法醫學親子鑒定及個體識別中的突變疑難案例及腐敗疑難檢材的檢測方面具有獨特的優勢。另一方面，插入缺失多態性遺傳標記與短串聯重復序列（short?tandem?repeats，STRs)一樣，為DNA長度多態性，可采用與其相同的檢測技術，因此與目前法醫實驗室通用的熒光標記檢測技術完全共平臺，易于在法醫實驗室中推廣應用。由于插入缺失多態性遺傳標記在法醫物證學中有獨特優勢，因而成為該領域的研究熱點，目前國外已有二個商業化試劑盒DIPplex?kit30和38-Indel?multiplex?assay得以開發運用，它們分別能檢測30和38個插入缺失多態性遺傳標記。

然而，由于Indels和SNPs一樣，是二等位基因，在識別力上存在局限性。二等位基因遺傳標記的信息量與具有多等位基因的STR遺傳標記差距較大，至少需要50-60個單基因座才能達到13-15個常用STR的累計個人識別率和非父排除率。而大量二等位基因遺傳標記的復合擴增，不僅增加了檢測成本，且大大增加了復合檢測和數據分析的難度。并且二等位基因無法提示混合樣本中多個來源個體的存在，無法用于混合樣本的分析。

人類基因組中存在少數緊密相鄰的Indel標記，若能將這些含有兩個以上緊密相鄰的Indel基因座人為地設計為一個多重插入缺失遺傳標記，這種遺傳標記將可能具有兩個以上的等位基因，從而成為獨特的多等位基因Indel遺傳標記，其個體識別力及非父排除率能相應得以提高。由于多重插入缺失擴增產物中等位基因數量增加，則可以用相對少數的遺傳標記獲得較高的效能，達到效能提高而成本降低的目的。

發明內容

本發明要解決的技術問題是克服單個Indel二等位基因遺傳標記識別力不足的缺點，篩選由多個緊密相鄰的二等位基因Indel多態性構成的具有多個等位基因的多重插入缺失遺傳標記，運用這種相對較少的新遺傳標記建立一個高效能的檢測體系，為法醫疑難親緣關系鑒定和個人識別提供一種新工具。

本發明的技術方案是提供一種基于20個多重插入缺失遺傳標記的法醫學復合檢測試劑盒，包括分離包裝的復合擴增引物混合物、等位基因分型標準物混合物；所述復合擴增引物混合物，包含了20個多重插入缺失遺傳標記的共計41條擴增引物；所述的等位基因分型標準物混合物由20個多重插入缺失遺傳標記的等位基因分型標準物構成，包括63個熒光素標記DNA片段，對應20個多重插入缺失遺傳標記的所有已知63個等位基因。

進一步的，所述的41條擴增引物的核苷酸序列如表3所示：

表3?41條擴增引物核苷酸序列

進一步的，所述等位基因分型標準物的核苷酸序列如表4所示：

表4等位基因分型標準物