[發明專利]金黃殼色三角帆蚌的培育方法

有效

• 申請號: 201310371817.5
• 申請日: 2013-08-23
• 公開（公告）號: CN103478025A
• 公開（公告）日: 2014-01-01
• 發明（設計）人: 聞海波;顧若波;曹哲明;華丹;徐跑;金武
• 申請（專利權）人: 中國水產科學研究院淡水漁業研究中心
• 主分類號: A01K61/00
• 分類號: A01K61/00
• 代理公司: 無錫市大為專利商標事務所 32104
• 代理人: 殷紅梅

1.一種金黃殼色三角帆蚌的培育方法，其特征是，包括以下步驟：

（1）選擇噴水有力、腹部邊緣柔軟、貝殼完整的三角帆蚌4～6齡親蚌，并鑒別雌雄；

（2）取雌雄親蚌的外套膜邊緣組織50mg，采用柱式動物組織總RNA抽提純化試劑盒提取總RNA；采用AMV第一鏈cDNA合成試劑盒合成單鏈cDNA；采用特定引物組合進行SRAP擴增，擴增產物經瓊脂糖電泳后在紫外燈下觀察，選出具有金黃殼色特異條帶序列的雌雄個體，作為金黃殼色三角帆蚌品系繁育親蚌；所述特定引物的基因序列為：正向引物為gactgcgtacgaattcga，反向引物為tgagtccaaaccggtcc；

（3）將經步驟（2）選出的雌雄親蚌建立1雌1雄或1雄多雌的家系，每組家系分別置于相互隔離的流水池中進行培育，流水池面積為1～2㎡，水位為15～25?cm，水流流速2～3?m/min；

（4）定期檢查各個家系中母本外鰓絲的懷幼情況，發現有成熟鉤介幼蟲，立即將成熟的母本選出，采用常規方法進行采苗，獲得幼蚌；將每個家系的幼蚌分別置于相互隔離的流水池進行培育，水流流速1～4?m/min，幼蚌培育至殼長1～2cm移入網眼直徑為2.5～3cm的網箱中，放養密度為200～300只/網箱，網箱底部鋪設一層塑料薄膜，在網箱底部放置2～3cm厚黃泥，網箱吊養于池塘中進行第二階段幼蚌培育，培育至殼長5～8cm，觀察各個家系F₁代幼蚌殼色表型，隨機檢查1000只F1代幼蚌殼色，若金黃殼色比例大于99%，表明親蚌殼色基因型選擇正確；

（5）剔除后代非金黃殼的家系親蚌，將通過步驟（4）驗證的親蚌建立金黃殼色核心繁育群體，作為金黃殼色三角帆蚌繁育的親蚌，采用步驟（4）的方式進行繁育，得到金黃殼色三角帆蚌。

2.如權利要求1所述的金黃殼色三角帆蚌的培育方法，其特征是：所述步驟（2）中，SRAP擴增的體系包括：合成得到的單鏈cDNA?3μL、濃度為2.5?mmol/L的脫氧核糖核苷三磷酸（dNTP）1.5μL、10×Taq?DNA聚合酶緩沖液2.5?μL、濃度為25?mmol/L?的MgCl₂?2.5?μL、正向引物和反向引物各0.5μL、Taq?DNA聚合酶0.2?μL、無菌重蒸水14.3?μL；擴增過程為：將體系在94℃變性5?min；然后94℃變性45?s、38℃退火45?s、72℃延伸l?min，進行5次循環；再94℃變性1?min、50℃退火1?min、72℃延伸l?min，進行30次循環；最后72℃延伸7?min。

3.如權利要求1所述的金黃殼色三角帆蚌的培育方法，其特征是：所述步驟（2）中瓊脂糖電泳的電泳膠配制過程：每100ml瓊脂糖凝膠加入3μl濃度為10mg/ml的溴化乙錠溶液；電泳條件：120～150V，時間為15～25min。

4.如權利要求1所述的金黃殼色三角帆蚌的培育方法，其特征是：所述步驟（4）中，幼蚌殼長小于2mm時，水流流速為1～2?m/min；幼蚌殼長≥2mm時，水流流速為2～4?m/min。

5.如權利要求1所述的金黃殼色三角帆蚌的培育方法，其特征是：所述金黃殼色特異條帶序列為：

TGAGTCCAAACCGGAGCACGTCGTAGTTTGGCATACAACATCGTAGTGTAGGCATACTACTTCTTAGTACGTATACCACATCTTAGTGTAGACATAGCACATTGTAGTGAAATTCGAGCATACGGCAGTATAATCATAGTACTTCGTAGTGTAGGCATAGCACACCGTAGTGTAGGCATATTAATTCGTACGCAG。