[發明專利]一種預處理方法及環丙沙星和紅霉素的檢測方法

有效

• 申請號: 201310360283.6
• 申請日: 2013-08-16
• 公開（公告）號: CN103399108A
• 公開（公告）日: 2013-11-20
• 發明（設計）人: 王淵龍;任婧;劉景;陳臣;張紅發;劉振民
• 申請（專利權）人: 光明乳業股份有限公司
• 主分類號: G01N30/06
• 分類號: G01N30/06;G01N30/02
• 代理公司: 上海智信專利代理有限公司 31002
• 代理人: 朱水平;余化鵬

1.一種預處理方法，其特征在于：所述的預處理方法包括以下步驟：

（1）將待測樣品、乙腈和無機鹽A混合，震蕩，離心，收集上清液；所述的無機鹽A為無水硫酸鎂、無水硫酸鈉、無水碳酸鈉、無水醋酸鈉和氯化鈉中的一種或多種；所述的待測樣品為原料乳和/或液態乳制品；

（2）將步驟（1）所述的上清液、C18填料和無機鹽B混合，渦旋并離心，收集上清液，過濾，即可；所述的無機鹽B為無水硫酸鈉和/或無水硫酸鎂，所述的C18填料的添加量為5-50mg/mL待測樣品。

2.如權利要求1所述的預處理方法，其特征在于：步驟（1）中，所述的液態乳制品為不含有固體顆粒的液態乳制品；所述的待測樣品中，所述的環丙沙星的含量為20～1000μg/Kg，所述的紅霉素的含量為20～1000μg/Kg；

步驟（1）中，所述的乙腈的添加量為每5-20g待測樣品添加乙腈10-40mL；

步驟（1）中，所述的無機鹽A的添加量為0.1-0.5g/mL待測樣品。

3.如權利要求1所述的預處理方法，其特征在于：步驟（1）中，所述的混合時還添加酸；所述的酸為甲酸和/或乙酸；所述的酸的添加量為所述的乙腈的添加量的1%，所述百分比為占乙腈的體積百分比。

4.如權利要求1所述的預處理方法，其特征在于：步驟（1）中，所述的震蕩的時間為3-10min，較佳的為5min；

步驟（1）中，所述的離心的轉速為5000-15000rpm，所述的離心的時間為5-30min；

步驟（1）中，所述的震蕩，離心，收集上清液的次數為1次以上，較佳的為2次；當所述的震蕩，離心，收集上清液的次數大于1次時，合并提取液。

5.如權利要求1所述的預處理方法，其特征在于：步驟（2）中所述的C18填料為十二烷基苯磺酸鈉，較佳的，所述的C18填料的購買廠家為博納艾杰爾科技有限公司；

步驟（2）中，所述的無水硫酸鈉的添加量為4-80mg/mL待測樣品；

步驟（2）中，所述的無水硫酸鎂的添加量為5-65mg/mL待測樣品；

步驟（2）中，所述的渦旋的時間為1-2min；

步驟（2）中，所述的離心的轉速為4000-9000rpm，所述的離心的時間為5-30min；

步驟（2）中，所述的過濾的方法為將溶液經有機微孔濾膜過濾，較佳的，所述的有機微孔濾膜的孔徑為0.22μm。

6.如權利要求1所述的預處理方法，其特征在于：步驟（2）中所述的過濾前，旋轉蒸發，再用乙腈復溶；

所述的旋轉蒸發為旋轉蒸發至乙腈完全蒸發；所述的乙腈復溶的乙腈的添加量為0.05-0.4mL/g待測樣品；所述的乙腈復溶后，所述的環丙沙星的含量為2μg/Kg以上，較佳的為20μg/Kg以上；所述的乙腈復溶后，所述的紅霉素的含量為1μg/Kg以上，較佳的為10μg/Kg以上。

7.一種環丙沙星和紅霉素的檢測方法，其特征在于：所述的檢測方法包括以下步驟：將如權利要求1-5所述的預處理方法得到的溶液，進行高效液相色譜-質譜檢測，即可。

8.如權利要求7所述的檢測方法，其特征在于：所述的高效液相色譜-質譜檢測中的高效液相色譜法檢測的色譜柱為十八硅烷鍵合硅膠色譜柱；所述的十八硅烷鍵合硅膠色譜柱的規格為4.6mm×250mm或4.6mm×150mm；

所述的高效液相色譜法檢測的流動相為：

流動相A：乙腈和0.1%的甲酸，所述百分比為甲酸占溶液的體積百分比；

流動相B：水和0.1%的甲酸，所述百分比為甲酸占溶液的體積百分比；

所述的高效液相色譜法檢測的柱溫為25℃-35℃，較佳的為30℃；

所述的高效液相色譜法檢測的待測樣品的流速較佳的為0.6-1.5mL/min，較佳的為1mL/min；

所述的環丙沙星的高效液相色譜法檢測的檢測波長為277nm；所述的紅霉素的高效液相色譜法檢測的檢測波長為482nm；

所述的高效液相色譜法檢測的進樣體積較佳的為15-25μL，較佳的為20μL。

9.如權利要求7所述的檢測方法，其特征在于：所述的高效液相色譜法檢測的梯度洗脫的條件為：

所述百分比為甲酸占溶液的體積百分比。

10.如權利要求7所述的檢測方法，其特征在于：所述的質譜檢測的條件為：

離子源：電噴霧離子源；

掃描模式：正離子模式；

毛細管電壓：3500伏；

離子源溫度120℃；

去溶劑溫度：550℃；

檢測方式：多反應監測；

定性離子對、定量離子對、碰撞氣能量和去簇電壓為：