[發明專利]一種新型抗HBV內源蛋白HNF1α及其應用

有效

• 申請號: 201310351219.1
• 申請日: 2013-08-13
• 公開（公告）號: CN103408652A
• 公開（公告）日: 2013-11-27
• 發明（設計）人: 周育森;李軍鋒;代曉朋;張偉;孫世惠;寇志華;趙光宇;于虹;郭彥
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍軍事醫學科學院微生物流行病研究所
• 主分類號: C07K14/47
• 分類號: C07K14/47;C12N15/12;C12N15/85;C12N5/10;A61K38/17;A61K48/00;A61P31/20;A61P1/16;A61P35/00;C12Q1/68
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢

技術領域

本發明涉及一種新型抗HBV內源蛋白HNF1α及其應用。

背景技術

乙型肝炎病毒(Hepatitis?B?Virus，HBV)感染是全球范圍內影響健康的重要問題，臨床HBV感染者可以引起急性或慢性乙型肝炎。在世界范圍內慢性感染人數超過了3.5億，占全球人數的5%，慢性感染人群存在肝硬化和肝細胞癌的高患病風險。對乙型肝炎病毒的有效治療可以阻止肝臟炎癥的進一步發展。目前，對抗肝炎的藥物分為幾大類：核苷類似物，干擾素類和免疫調節劑（周俠，呂秋軍.抗乙型肝炎病毒藥物的作用機制及靶點的研究進展.國外醫學藥學分冊,2005，32(3):184-188.）。到目前為止，人類還沒有找到能徹底清除體內HBV并最終治愈乙型肝炎的有效藥物。

發明內容

本發明的目的是提供一種新型抗HBV內源蛋白HNF1α及其應用。

本發明所提供的一種蛋白，其氨基酸序列如SEQ?ID?No.1所示。

上述蛋白的編碼基因也屬于本發明的保護范圍。

上述編碼基因為如下中至少一種：

1）SEQ?ID?No.2所示的DNA分子；

2）在嚴格條件下與1）限定的DNA分子雜交且編碼SEQ?ID?No.1所示蛋白質的DNA分子；

3）與1）或2）限定的DNA分子具有90％以上的同一性且編碼SEQ?ID?No.1所示蛋白質的DNA分子。

含有上述任一編碼基因的重組載體、表達盒、轉基因細胞系或重組菌也屬于本發明的保護范圍。

上述蛋白或上述編碼基因在制備抑制HBV復制或增殖的產品中的應用也屬于本發明的保護范圍。

上述蛋白或上述編碼基因在制備抑制HBV分泌HBeAg和HBsAg的產品中的應用也屬于本發明的保護范圍。

上述應用中，所述抑制HBV復制或增殖是通過上述蛋白與HBV中的增強子I相互作用實現的。

上述蛋白或上述編碼基因在制備預防和/或治療HBV引起的疾病的產品中的應用也屬于本發明的保護范圍。

上述應用中，所述HBV引起的疾病為急性乙型肝炎或慢性乙型肝炎。

上述應用中，所述HBV引起的疾病為肝硬化或肝細胞癌。

HBV的增強子I作為靶點在開發或設計預防和/或治療HBV引起的疾病的產品中的應用也屬于本發明的保護范圍。

HBV的增強子I作為靶點在開發或設計抑制HBV復制或增殖的產品中的應用也屬于本發明的保護范圍。

上述HBV的增強子I的核苷酸序列如SEQ?ID?No.3所示。

HNF1α可以抑制肝細胞分泌表達s抗原（HBsAg），e抗原（HBeAg）以及降低HBVDNA載量。HNF1α抑制性載體可以通過抑制肝細胞內源性HNF1α的表達進而促進HBV分泌表達s抗原、e抗原以及提高HBV?DNA載量，表明HNF1α能抑制HBV的復制及蛋白的表達。并且HNF1α可能通過與HBV增強子I的特定位點結合進而抑制HBV的復制。

本發明提供的一種新型抗HBV內源蛋白可以開發成為抗HBV的有效藥物，本發明為抗HBV藥物的研究及開發奠定了基礎。

附圖說明

圖1為HNF1α的過表達檢測。

圖2為HNF1α真核表達載體對HBsAg、HBeAg以及HBV?DNA載量的影響。

圖3為HNF1α抑制載體的構建及抑制效果分析。

圖4為HNF1α與HBV增強子I的相互作用分析。

具體實施方式

下述實施例中所使用的實驗方法如無特殊說明，均為常規方法。

下述實施例中所用的材料、試劑等，如無特殊說明，均可從商業途徑得到。

真核表達載體pcDNA3.1(+)購自Invitrogen公司。

載體pSilencer2.1-U6hygro購自ambion公司。

pHBV1.2在文獻“周勇,閻少多,閆虎,段相國,王紀東,章金剛,詹林盛.樹鼩水動力轉染方法的建立及在HBV模型探索中的應用[J].軍事醫學,2011,10:742-745.”中公開過，公眾可從中國人民解放軍軍事醫學科學院微生物流行病研究所獲得。

HBsAg與HBeAg?ELISA檢測試劑盒均購自上海科華生物公司。

HBV?DNA定量檢測試劑盒購自匹基公司。

載體pGL3-basic、pRL-TK以及雙熒光素酶報告基因檢測試劑盒購自promega公司。