[發明專利]沙門氏菌富集和快速檢測方法

有效

• 申請號: 201310350230.6
• 申請日: 2013-08-13
• 公開（公告）號: CN103439497A
• 公開（公告）日: 2013-12-11
• 發明（設計）人: 賴衛華;山珊
• 申請（專利權）人: 南昌大學
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569
• 代理公司: 南昌新天下專利商標代理有限公司 36115
• 代理人: 施秀瑾

1.沙門氏菌富集和快速檢測方法，其特征在于包括以下步驟：1）制備偶聯單抗的金磁微粒；取抗沙門氏菌單抗與納米金磁微?；旌?；在溫度37℃時，放在轉速為10-15rpm的旋轉儀上，偶聯時間30~60min，磁分離3~5min，棄上清；用清洗緩沖液清洗3遍之后，用1mL封閉劑與磁珠混合封閉1h；2）使用偶聯單抗的金磁微粒捕獲菌：培養沙門氏菌，將菌液濃度調整為10⁷CFU/mL、10⁶?CFU/mL、10⁵CFU/mL、10⁴CFU/mL，各取1?mL備用；取待測樣品溶液1?mL、各濃度菌液1?mL，分別與步驟1）所得偶聯單抗的金磁微粒100~150μg，溫度37℃，轉速10-15rpm混合孵育30~60min，；孵育后磁分離3~5min后，棄上清，用PBS緩沖液清洗后，復溶于PBS中；3）制作免疫層析試紙條；將沙門氏菌兔多抗和兔抗鼠二抗噴到硝酸纖維膜上分別作為檢測線T線和質控線C線，濃度均為1.0~2.0mg/mL，噴量均為0.5~1.0μL/cm，37℃真空干燥過夜，將樣本墊、硝酸纖維膜、吸水紙、濾紙依次粘貼在PVC底板上，貼好后將其切成4mm寬的條子，裝卡；將制備好的試紙條置于錫箔袋中加干燥劑密封，置于干燥缸保存備用；4）利用雙抗夾心法對樣品進行測定；將捕獲到菌的金磁微粒稀釋到濃度50?~150?μg?/mL，取100μL滴加到試紙條加樣孔中，10min后用免疫層析分析儀讀取，記錄T線吸光度、C線吸光度和T/C的值；5）定性分析：用肉眼觀察結果進行定性分析，T線顯色則說明樣品中有沙門氏菌，T線不顯色則說明樣品中沒有沙門氏菌或是含有沙門氏菌的量低于最低檢測下限10⁴CFU/mL；6）定量分析：使用免疫層析分析儀測量T線、C線的吸光度，T線和C線的吸光度的比值記為T/C值，以不同菌的濃度為橫坐標，T/C值為縱坐標繪制標準曲線；參考所做的標準曲線圖，確定普通樣品中的沙門氏菌數量。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于所述步驟1）納米金磁微粒粒徑為50nm；步驟1）抗沙門氏菌單抗的量200~300μg對應50nm的納米金磁微粒的量為0.5~1.0mg。

3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：步驟3）所述免疫層析試紙條是在粘性底板上依次粘貼樣本墊、硝酸纖維膜、吸水紙、濾紙組成，沒有結合墊。