[發明專利]一種快速高效的植物寄生線蟲總RNA提取方法及其應用

有效

• 申請號: 201310345091.8
• 申請日: 2013-08-09
• 公開（公告）號: CN103387977A
• 公開（公告）日: 2013-11-13
• 發明（設計）人: 彭德良;王高峰;黃文坤;孔令安;賀文婷;崔江寬
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院植物保護研究所
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10
• 代理公司: 北京兆君聯合知識產權代理事務所(普通合伙) 11333
• 代理人: 胡敬紅

1.植物線蟲組織破碎方法，采用如下步驟：（1）制備玻璃粉末：將普通玻璃破碎后收集過60目篩子的粉末，用濃鹽酸洗后用去離子水洗，直至pH7.0，再高溫去除RNA酶，冷卻至室溫備用；（2）攪拌破碎：于無RNA酶離心管中加入玻璃粉末和TRIzol試劑以及線蟲體，用微量電動組織勻漿器攪拌玻璃粉末，直至線蟲組織破碎。

2.根據權利要求1所述的方法，所述高溫去除RNA酶為180℃高溫滅菌10h。

3.根據權利要求1所述的方法，所述玻璃粉末與TRIzol試劑的體積比為1：1.6。

4.根據權利要求1所述的方法，所述微量電動組織勻漿器的研磨槌經過DEPC水浸泡處理。

5.一種植物線蟲微量總RNA提取方法，為按權利要求1-4任一方法將植物線蟲組織破碎后，再提取線蟲總RNA。

6.根據權利要求5所述的方法，所述提取線蟲總RNA的方法為將線蟲組織破碎后的混合物一次離心，上清液用氯仿萃取后二次離心，取上清液加核酸共沉淀劑，1/10體積的3mM醋酸鈉和2.5倍體積的預冷無水乙醇后三次離心，取沉淀物用75%酒精清洗，干燥即可。

7.根據權利要求6所述的方法，所述一次離心前可補加TRIzol試劑，使玻璃粉末與TRIzol試劑的體積比至1：4。

8.根據權利要求5所述的方法，所述線蟲為侵染前二齡幼蟲。

9.根據權利要求5所述的方法，所述植物線蟲為大豆孢囊線蟲（Heterodera?glycines）。