[發明專利]一種利用核糖體蛋白S29鑒定煙草生物毒性的方法

有效

• 申請號: 201310340705.3
• 申請日: 2013-08-07
• 公開（公告）號: CN103399080A
• 公開（公告）日: 2013-11-20
• 發明（設計）人: 儲國海;周國俊;黃芳芳;余捷凱;胡集祎;胡函光;鄭樹
• 申請（專利權）人: 浙江中煙工業有限責任公司
• 主分類號: G01N27/64
• 分類號: G01N27/64
• 代理公司: 杭州天勤知識產權代理有限公司 33224
• 代理人: 胡紅娟

技術領域

本發明涉及煙草檢測領域，具體涉及一種利用核糖體蛋白S29鑒定煙草生物毒性的方法。

背景技術

吸煙可以導致健康問題，這已在多項流行病學調查和實驗研究中得到證實。然而由于許多煙民吸煙上癮或者不想戒煙，世界范圍內煙草消費有增無減，我國是煙草生產和消費大國。在當前和今后較長的一段時間內，龐大的煙民隊伍將依然存在。因此，降低卷煙的危害，對于發展煙草工業，保護煙民健康具有重大意義。

為了降低吸煙對人體的危害，國內外煙草界已經在改進濾嘴、處理煙草煙絲等方面做了很多工作。但是對于如何檢測和鑒定煙草生物毒性需進一步研究。由于煙草煙氣是一種非常復雜的混合物，各成份之間存在相互作用，因此，對其中單獨某一成份的研究并不能顯示整個煙氣混合物的生物活性。所以，在評價煙草煙氣的毒性過程中應該對整個煙氣混合物進行綜合評價。短期體外試驗的價值已經得到了科學界、政府機構和公司的一致認可，它具有快速廉價的優點，并且能對毒性效應進行定量評價。

卷煙煙氣是一個復雜的混合物，應該用多種試驗從不同的生物學終點進行評價。如果能夠為吸煙與健康建立一個快速簡便的評價體系，并為降低卷煙危害的研發和評價方法提供依據和研究方向，可為行業和衛生界提供吸煙與健康新的評價方法和思路，具有重大社會效益。

表面加強激光解吸電離-飛行時間質譜（Surface?Enhanced?Laser?Desorption/Ionization-Time?of?Flight-Mass?Spectrometry，SELDI-TOF-MS）技術是最近幾年才發展起來的一種新的蛋白質組學研究方法，由蛋白質芯片、飛行時間質譜儀及蛋白質芯片系統分析軟件三部分構成，其中蛋白質芯片是核心技術。

SELDI-TOF-MS技術根本的原理是通過使用特異的探針表面俘獲蛋白質來增強親合力。SELDI可以克服二維凝膠電泳存在的內在問題，包括疏水性問題、強酸性、強堿性的蛋白質的分離、膜蛋白的分離問題、低分子量檢測的靈敏性、低豐度蛋白質的靈敏性問題。蛋白質只要與SELDI蛋白質芯片結合，就可通過質譜儀按蛋白質質量、電荷比（m/z）的不同及量的多寡、位置、強弱不同的峰直觀的表現出來，進而形成相應圖譜，用于分析、判別。同時，SELDI技術是從基質輔助激光解吸電離飛行時間質譜（MALDI）基礎上改進而來的，由于部分非特異結合的物質在分析前已被洗去，因而出現的峰非常一致，有利于后期分析。

使用SELDI-TOF-MS技術檢測到的絕大多數差異性蛋白其究竟為何種蛋白質、所具有的生物學功能及其在吸煙對生物體造成損害的過程中所起到的作用目前尚未知，存在的研究空間很大。如何純化、分析和鑒定這些差異蛋白也成為通過質譜技術從生物學角度評估卷煙生物毒性的一個重要部分。

發明內容

本發明提供了一種利用核糖體蛋白S29鑒定煙草生物毒性的方法，該方法準確率高，鑒定結果可靠。

一種利用核糖體蛋白S29鑒定煙草生物毒性的方法，包括：

（1）利用受檢煙草建立大鼠煙氣急性中毒模型；

（2）獲取所述大鼠煙氣急性中毒模型的血清；

（3）檢測血清中核糖體蛋白S29的表達強度，鑒定受檢煙草的生物毒性；

鑒定方法為：

若血清中核糖體蛋白S29的表達強度高于718.3，則受檢煙草生物毒性低；若血清中核糖體蛋白S29的表達強度低于718.3，則受檢煙草生物毒性高；

所述核糖體蛋白S29的氨基酸序列如SEQ?ID?No.1所示。由于所述核糖體蛋白S29在不同物種之間呈現高度序列保守性，因此，除大鼠外，還可利用其他實驗動物來建立煙氣急性中毒模型。

718.3的表達強度是測試獲得的、低焦油煙組大鼠和普通煙組大鼠中核糖體蛋白S29表達強度的平均值。

步驟（1）中，大鼠煙氣急性中毒模型的建立方法為：

利用自動吸煙機將受檢煙草的煙氣與清潔空氣混合，將混合氣體恒流送達各容鼠器的吸煙孔供試驗大鼠吸入，構建大鼠煙氣急性中毒模型。

煙氣與清潔空氣的體積比優選為1:2。

試驗大鼠吸入混合氣體的時間優選為3天，每天吸入1小時。

步驟（3）中，利用表面加強激光解吸電離-飛行時間質譜法檢測核糖體蛋白S29的表達強度。