[發明專利]基于細胞培養技術的人參皂甙提取方法無效
| 申請號： | 201310336081.8 | 申請日： | 2013-08-05 |
| 公開（公告）號： | CN104342399A | 公開（公告）日： | 2015-02-11 |
| 發明（設計）人： | 李肖利 | 申請（專利權）人： | 鄭州同心創遠生物科技有限公司 |
| 主分類號： | C12N5/04 | 分類號： | C12N5/04;C07J17/00 |
| 代理公司： | 暫無信息 | 代理人： | 暫無信息 |
| 地址： | 450016 河南省鄭州市經*** | 國省代碼： | 河南;41 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 基于 細胞培養 技術 人參 皂甙 提取 方法 | ||
1.基于細胞培養技術的人參皂甙提取方法，其特征在于，，是一種利用多年生人參的根細胞培養，利用酶技術縮短細胞培養周期，來生產人參皂甙及多糖的方法，具體流程為：
（1）種子細胞采集：
①取新鮮的多年生人參的根清洗消毒，將洗凈的人參塊根用10-20%次氯酸鈉溶液浸泡10-30分鐘，用無菌水清洗塊根至次氯酸鈉無殘留；
②將清潔后的塊根放入打漿機加入MS培養基，每1.5g加入10ml，打漿；
③將打漿液加入纖維素酶100mg/kg，放置3-5小時，用50-80微米孔徑的微孔濾器過濾，濾液用低速離心機分離，去雜質及上清液收集種子細胞；
（2）種子細胞培養：
①將收集到的種子細胞接種到含改良MS培養基的種子罐中，接種量為10-20g/L，調pH5-6，溫度20-25℃；
②搖床或震蕩種子罐培養20-30小時，計算細胞數量20000-40000個/ml，即可擴大培養；
（3）細胞擴大培養：
①將培養好的種子細胞接種于有機械攪拌的生物反應器內，懸浮培養，培養基用改良的MS培養基，接種量為15-25g/L，攪拌速率90-120r/min，pH5-6，通入過濾空氣，速率0.01-0.05m3/s；
②加入生長素2,4-D0.5-1mg/L，果膠酶50-80mg/L，暗培養20-25天，細胞計數35000-50000/ml即停止培養；
（4）采用離心或其他方法收集人參植物細胞，即可用常規方法提取人參皂甙及多糖。
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