[發明專利]一種結核蛋白及其制備和應用

無效

• 申請號: 201310335183.8
• 申請日: 2013-08-02
• 公開（公告）號: CN103360480A
• 公開（公告）日: 2013-10-23
• 發明（設計）人: 焦新安;殷月蘭;高云飛;付紅;徐正中;陳祥;潘志明;孫林
• 申請（專利權）人: 揚州大學
• 主分類號: C07K14/35
• 分類號: C07K14/35;C12N15/31;C12N15/70;G01N33/569
• 代理公司: 南京知識律師事務所 32207
• 代理人: 盧亞麗

1.一種針對牛結核病具有免疫原性的重組蛋白，為含有分枝桿菌BCG_2653c的蛋白。

2.如權利要求1所述重組蛋白，其特征在于，BCG_2653c的核苷酸序列為SEQ?ID?NO:1，其氨基酸序列為SEQ?ID?NO:2。

3.根據權利要求1所述的重組蛋白，其特征在于，通過下述方法得到：從BCG的基因組中擴增出BCG_2653c片段，將膠回收后得到的BCG_2653c片段與pMD-20T載體連接，轉化至大腸桿菌DH5α感受態細胞中，經PCR與雙酶切驗證正確的陽性克隆測序；將測序正確的陽性克隆進行提取質粒，進而雙酶切，回收目的片段，再與表達載體pET-30a連接，轉化至大腸桿菌DH5α感受態細胞中，經PCR與雙酶切驗證正確，將陽性質粒轉化至大腸桿菌DE3感受態細胞，通過IPTG誘導表達，得到包涵體蛋白，經蛋白變復性后，得到有活性的BCG_2653c蛋白。

4.權利要求1所述重組蛋白的制備方法，是：從BCG的基因組中擴增出BCG_2653c片段，將膠回收后得到的BCG_2653c片段與pMD-20T載體連接，轉化至大腸桿菌DH5α感受態細胞中，經PCR與雙酶切驗證正確的陽性克隆測序；將測序正確的陽性克隆進行提取質粒，進而雙酶切，回收目的片段，再與表達載體pET-30a連接，轉化至大腸桿菌DH5α感受態細胞中，經PCR與雙酶切驗證正確，將陽性質粒轉化至大腸桿菌DE3感受態細胞，通過IPTG誘導表達，得到包涵體蛋白，經蛋白變復性后，得到有活性的BCG_2653c蛋白。

5.權利要求1-3之一所述的重組蛋白在制備牛結核病檢測試劑中的應用。