[發明專利]一種促進麻瘋樹外植體再生不定芽的方法

有效

• 申請號: 201310333563.8
• 申請日: 2013-08-02
• 公開（公告）號: CN103430841A
• 公開（公告）日: 2013-12-11
• 發明（設計）人: 劉穎;楊躍生;劉振蘭;莊楚雄;李靜;童欣;惠文凱;陳曉陽
• 申請（專利權）人: 華南農業大學
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 廣州粵高專利商標代理有限公司 44102
• 代理人: 林麗明

技術領域

本發明涉及植物生物技術領域，具體地，涉及一種促進麻瘋樹外植體再生不定芽的方法。?

背景技術

伴隨著全球對化石燃料的需求日益增長，存儲的化石燃料即將耗盡，人們越來越關注可再生的生物柴油。在可產生生物柴油的候選植物中，屬于大戟科的麻瘋樹（Jatroha?curcas?L.）具有明顯的優勢，它的種子含油量高，種仁含油量可達40%~60%?，同時，麻瘋樹油中含有活性成分多，如毒蛋白、麻瘋酮等有著重要的農藥和醫藥價值。?

然而，大力推廣麻瘋樹的種植卻面臨一系列問題，雖然麻瘋樹種子中含油量高，但種子產量不高；種油中活性成分多，但仍需要改變油的成分才能直接替代化石燃料；麻瘋樹對環境要求較高，耐寒能力弱，分布區域較窄。麻瘋樹屬包括175個種，可以通過種間雜交引入優良性狀，但所需周期長，不能夠獲得特異的外源基因，故主要通過基因轉化改變遺傳背景。高頻率的植株再生體系是基因轉化的基礎。?

麻瘋樹外植體根據來源不同可以分為不同的類型。從成年麻瘋樹植株上直接獲得葉片、葉柄經處理后可以得到成年植株葉片外植體、成年植株葉柄外植體。將麻瘋樹種子進行無菌培養得到的無菌苗，從無菌苗上得到無菌下胚軸、無菌子葉葉片和無菌子葉葉柄，經處理后可以得到無菌下胚軸外植體、無菌子葉葉片外植體和無菌子葉葉柄外植體。將麻瘋樹種子經常規培育、萌發得到的萌發苗，從萌發苗上可以得到下胚軸和真葉葉柄，經處理后可以得到種子苗下胚軸外植體和真葉葉柄外植體。?

現有技術中誘導麻瘋樹外植體再生不定芽時，通常是在麻瘋樹外植體不定芽再生培養基中添加細胞分裂素，而最常用的細胞分裂素為6-芐氨基腺嘌呤（6-BA），濃度為1~2?mg/l；6-糠氨基嘌呤（6-KT），濃度為0.1~1.0?mg/l或苯基噻二唑基脲（TDZ），濃度為0.05~0.5?mg/l。在這種條件下葉柄外植體的不定芽再生效率很低，芽體的質量也較差。同時，這些再生體系均存在周期長（80?d以上）、再生率不高的問題，嚴重制約了麻瘋樹遺傳轉化研究的開展。?

發明內容

本發明為了克服現有技術麻瘋外植體再生不定芽時再生率低、再生芽體質量差、再生周期長的缺陷，提供一種促進麻瘋樹外植體再生不定芽的方法。所述方法簡便，可以顯著縮短整個培養周期，而且通過所述的方法可以得到數量更多、質量更好的不定芽。?

本發明通過以下技術方案予以實現上述目的：?

一種促進麻瘋樹外植體再生不定芽的方法，其特征在于，包括如下步驟：

S1.獲得麻瘋樹外植體；

????S2.將步驟S1中的麻瘋樹外植體用10~60?mg/l苯基噻二唑基脲（TDZ）溶液浸泡處理5~40?min；

S3.將步驟S2處理后的麻瘋樹外植體以橫放方式接種至無激素的培養基上培養；

????所述橫放方式為將外植體的橫切面與培養基的水平表面相垂直；

所述麻瘋樹外植體為成年植株葉片外植體、無菌下胚軸外植體、無菌子葉葉片外植體、無菌子葉葉柄外植體、種子苗下胚軸外植體或真葉葉柄外植體。

麻瘋樹外植體根據來源不同可以分為不同的類型。從成年麻瘋樹植株上直接獲得葉片、葉柄經處理后可以得到成年植株葉片外植體、成年植株葉柄外植體。將麻瘋樹種子進行無菌培養得到的無菌苗，從無菌苗上得到無菌下胚軸、無菌子葉葉片和無菌子葉葉柄，經處理后可以得到無菌下胚軸外植體、無菌子葉葉片外植體和無菌子葉葉柄外植體。將麻瘋樹種子經常規培育、萌發得到的萌發苗，從萌發苗上可以得到下胚軸和真葉葉柄，經處理后可以得到種子苗下胚軸外植體和真葉葉柄外植體。?

????優選地，所述無菌下胚軸外植體用20?mg/l苯基噻二唑基脲溶液浸泡處理20?min。?

????優選地，所述成年植株葉片外植體或無菌子葉葉片外植體用20?mg/l苯基噻二唑基脲溶液浸泡處理40?min。?

優選地，所述無菌子葉葉柄外植體或真葉葉柄外植體用20?mg/l苯基噻二唑基脲溶液浸泡處理20?min。?