[發(fā)明專利]Isl1基因或蛋白在竇房結(jié)異常相關(guān)疾病中的應(yīng)用

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310325147.3
• 申請(qǐng)日: 2013-07-30
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN104342485A
• 公開(kāi)（公告）日: 2015-02-11
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 孫云甫;梁興群
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 上海市東方醫(yī)院（同濟(jì)大學(xué)附屬東方醫(yī)院）
• 主分類號(hào): C12Q1/68
• 分類號(hào): C12Q1/68;G01N33/68;A01K67/027
• 代理公司: 上海一平知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 31266
• 代理人: 祝蓮君;劉真真

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及先天性心臟病診斷治療領(lǐng)域，具體地，本發(fā)明涉及Isl1基因、蛋白在診斷竇房結(jié)異常相關(guān)疾病中的應(yīng)用。?

背景技術(shù)

心臟起搏傳導(dǎo)系統(tǒng)是一種特殊的心肌組織，其產(chǎn)生和傳播電脈沖，在調(diào)控心臟的節(jié)律性收縮中起重要作用。起搏傳導(dǎo)系統(tǒng)發(fā)育和功能的異常可導(dǎo)致心律失常及心源性猝死。?

在中國(guó)，每年有超過(guò)50萬(wàn)例發(fā)生心源性猝死。而心律失常是心源性猝死的首要原因。?

心臟起搏傳導(dǎo)系統(tǒng)由起搏器(竇房結(jié)/SAN）、房室節(jié)(AVN）和浦肯野纖維組成。在小鼠，在胚胎第8天(E8.0）心臟流入道開(kāi)始記錄到心臟起搏信號(hào)。在胚胎第9.5天(E9.5），心臟流入道的靜脈竇(sinus?venosus）為原始起搏區(qū)域。而形態(tài)學(xué)上的起搏器在E11.5形成，其后進(jìn)一步成熟，形成為一個(gè)功能完整的起搏器。起搏器的形成是一個(gè)復(fù)雜的、精細(xì)調(diào)節(jié)的過(guò)程，涉及多種不同來(lái)源的心臟譜系。?

近年來(lái)，對(duì)心臟傳導(dǎo)系統(tǒng)形成的分子調(diào)控機(jī)制的研究取得了顯著進(jìn)展。研究表明，來(lái)源于心室內(nèi)膜和冠狀動(dòng)脈的Endothelin-1在浦肯野纖維的誘導(dǎo)分化中起著關(guān)鍵性的作用。Notch和Neuregulin信號(hào)通路在斑馬魚(yú)的AV(房-室）傳導(dǎo)系統(tǒng)的形成中發(fā)揮重要作用。在心臟和心肌細(xì)胞體外培養(yǎng)中，Neuregulin-1和Endothelin-1能夠誘導(dǎo)小鼠心肌細(xì)胞分化為起搏傳導(dǎo)系統(tǒng)細(xì)胞。轉(zhuǎn)錄因子Nkx2.5、Tbx5和GATA4相互作用，形成一個(gè)重要的心臟轉(zhuǎn)錄調(diào)控網(wǎng)絡(luò)，在心臟的發(fā)育，包括AV傳導(dǎo)系統(tǒng)的形成和功能中起重要作用。這些因子的變異導(dǎo)致了人類先天性心臟病，伴有AV傳導(dǎo)系統(tǒng)異常。?

但相對(duì)而言，由于已知與起搏相關(guān)基因的缺失會(huì)造成胚胎大量早期死亡，起搏器細(xì)胞在組織結(jié)構(gòu)上也難以分辨，且起搏細(xì)胞數(shù)量有限，難以分離純化，造成了現(xiàn)有技術(shù)中對(duì)心臟起搏傳導(dǎo)系統(tǒng)，特別是對(duì)心臟起搏細(xì)胞形成和功能調(diào)節(jié)機(jī)制的了解非常有限。?

因此，為了深入了解人類心律失常發(fā)生機(jī)理，有助于優(yōu)生優(yōu)育以及提供治療手段，本領(lǐng)域迫切需要開(kāi)發(fā)與心臟系統(tǒng)發(fā)育和功能相關(guān)的基因及其調(diào)控通路。?

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的就是提供一種與心臟系統(tǒng)發(fā)育和功能相關(guān)的基因及其調(diào)控通路和應(yīng)用。?

本發(fā)明公開(kāi)了一種LIM同源結(jié)構(gòu)域轉(zhuǎn)錄因子(LIM?homeodomain?transcription?factor，Islet1，Isl1）基因或其蛋白的用途，用于制備檢測(cè)或預(yù)測(cè)竇房結(jié)(SAN）異常相關(guān)疾病的試劑或試劑盒。?

在另一優(yōu)選例中，所述的Isl1基因包括Isl1基因組序列、cDNA序列或mRNA序列。?

在另一優(yōu)選例中，所述的Isl1基因或蛋白來(lái)自于哺乳動(dòng)物，更佳地來(lái)源于嚙齒動(dòng)物(如小鼠、大鼠）或靈長(zhǎng)類動(dòng)物（如人）。?

在另一優(yōu)選例中，所述的Isl1基因或蛋白來(lái)源于人。?

在另一優(yōu)選例中，所述的Isl1基因的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.:1所示，其編碼的蛋白序列如SEQ?ID?NO.:2所示：?

在另一優(yōu)選例中，所述的竇房結(jié)異常相關(guān)疾病包括：病竇綜合征或心臟傳導(dǎo)系統(tǒng)相關(guān)心律失常。?

在另一優(yōu)選例中，所述的心臟傳導(dǎo)系統(tǒng)相關(guān)心律失常包括房顫、房撲、房早、室早、預(yù)激綜合征、竇性心律不齊。?

在另一優(yōu)選例中，所述的試劑包括Isl1特異性引物、特異性抗體、探針和/或芯片。?

在另一優(yōu)選例中，所述的檢測(cè)包括酶聯(lián)免疫反應(yīng)法(ELISA法）檢測(cè)或時(shí)間分辨免疫熒光法(TRFIA法）檢測(cè)。?

在另一優(yōu)選例中，所述的Isl1蛋白或其特異性抗體偶聯(lián)有或帶有可檢測(cè)標(biāo)記。?

在另一優(yōu)選例中，所述可檢測(cè)標(biāo)記選自下組：生色團(tuán)、化學(xué)發(fā)光基團(tuán)、熒光團(tuán)、同位素或酶。?

在另一優(yōu)選例中，所述Isl1的特異性抗體是單克隆抗體或多克隆抗體。?

在另一優(yōu)選例中，所述檢測(cè)是測(cè)定羊水樣品、組織樣品、血液樣品、血清樣品或體液樣品。?

在另一優(yōu)選例中，所述檢測(cè)是測(cè)定羊水樣品。?

在另一優(yōu)選例中，所述的羊水樣品來(lái)自小鼠E8-E14或人類12周20周的胚胎。?

在另一優(yōu)選例中，所述的羊水樣品來(lái)自小鼠E9.5-E11.5或人類4周12周的胚胎。?

在另一優(yōu)選例中，所述的試劑包括：?

(a）檢測(cè)Isl1的核酸芯片；?

(b）抗Isl1蛋白的特異性抗體；和/或?