[發明專利]一種苦木中苦木堿含量的檢測方法

有效

• 申請號: 201310320938.7
• 申請日: 2013-07-26
• 公開（公告）號: CN103424499A
• 公開（公告）日: 2013-12-04
• 發明（設計）人: 姚小華;林青;李楚源;黃琳;匡艷輝
• 申請（專利權）人: 廣州白云山和記黃埔中藥有限公司
• 主分類號: G01N30/88
• 分類號: G01N30/88
• 代理公司: 北京集佳知識產權代理有限公司 11227
• 代理人: 趙青朵;馮瓊

技術領域

本發明涉及分析化學領域，尤其涉及一種苦木中苦木堿含量的檢測方法。

背景技術

苦木為苦木科植物苦木（Picrasma?quassioides(D.Don)Benn.）的干燥枝及葉。收載于《中華人民共和國藥典》2010年版一部。性寒，味苦。具有清熱，祛濕，解毒之功效；用于治療風熱感冒，咽喉腫痛，腹瀉下痢，濕癤，毒蛇咬傷等癥，是消炎利膽片等中成藥的主要藥材原料?？嗄局饕飰A、苦味素、苦木內酯等。生物堿主要為苦木堿，其中，苦木堿乙，苦木堿己和苦木堿丁的含量對苦木藥材的質量有著重要的影響。苦木堿乙（1-甲氧甲酰-β-咔巴啉）的結構如式I所示，苦木堿己（4-甲氧基-5-羥基-鐵屎米酮）的結構如式II所示，苦木堿丁（4,5-二甲氧基-鐵屎米酮）的結構如式III所示。

式I???????式II

式III

《中華人民共和國藥典》2010年版一部中苦木藥材質量標準只有“性狀”和“鑒別”項，尚無定量測定項，無法全面深入的控制藥材質量。為了有效控制苦木藥材質量，比較不同藥用部位的差別，對苦木藥材中苦木堿乙，苦木堿己和苦木堿丁的含量進行定量分析十分重要。而苦木藥材質量標準尚無定量測定項，標準亟待提高，目前對苦木中苦木堿的定量分析方法無法對苦木堿乙，苦木堿己和苦木堿丁同時進行定量。

發明內容

有鑒于此，本發明要解決的技術問題在于提供一種苦木中苦木堿含量的檢測方法，該方法可以同時對苦木中苦木堿乙，苦木堿己和苦木堿丁同時進行定量分析。

本發明提供了一種苦木中苦木堿含量的檢測方法，包括以下步驟：

步驟1：取苦木堿乙標準品、苦木堿己標準品、苦木堿丁標準品，以醇類為溶劑，配制含有苦木堿乙標準品、苦木堿己標準品和苦木堿丁標準品的標準品溶液；取苦木干燥粉碎后與醇類水溶液混合，經回流提取、冷卻定容、過濾，獲得待檢溶液；

步驟2：取標準品溶液經HPLC檢測；

以苦木堿乙標準品的峰面積為第一縱坐標，苦木堿乙標準品的進樣量為第一橫坐標，繪制苦木堿乙標準品的標準曲線；

以苦木堿己標準品的峰面積為第二縱坐標，苦木堿己標準品的進樣量為第二橫坐標，繪制苦木堿己標準品的標準曲線；

以苦木堿丁標準品的峰面積為第三縱坐標，苦木堿丁標準品的進樣量為第三橫坐標，繪制苦木堿丁標準品的標準曲線；

步驟3：取待檢溶液經HPLC檢測，獲得待檢溶液的峰面積，與苦木堿乙標準品的標準曲線、苦木堿己標準品的標準曲線、苦木堿丁標準品的標準曲線比較，根據標準曲線法獲得待檢溶液中苦木堿乙、苦木堿己、苦木堿丁的含量；

步驟2或步驟3中HPLC檢測的色譜條件為：采用C18色譜柱，柱溫20℃～40℃，檢測波長為205nm～280nm，以乙腈為流動相A相、酸水為流動相B相，流動相流速為1mL/min；梯度洗脫程序為：0～35min，乙腈體積百分數由5%至45%；35min～40min，乙腈體積百分數由45%至80%；40min～50min，乙腈體積百分數由80%至90%；50min～60min，乙腈體積百分數由90%至95%；

其中，醇類為甲醇或乙醇，酸水中酸的體積分數為0.1%～1%，酸的種類為磷酸、甲酸或醋酸。

本發明提供的方法采用高效液相色譜法（HPLC），通過調整色譜條件，將苦木堿乙，苦木堿己和苦木堿丁逐一分離，從而對苦木中苦木堿乙，苦木堿己和苦木堿丁同時進行定量分析。

目前常采用的C18色譜柱可接受的pH值為2～8，流動相的pH值小于2時，會導致鍵合相的水解；當流動相pH值大于7時硅膠易溶解。液相色譜是樣品組分在柱填料與流動相之間質量交換而達到分離的目的，因此要求流動相對樣品具有一定的溶解能力且與樣品不產生化學反應，其黏度要盡量小，以便得到好的分離效果；且流動相的物化性質要與使用的檢測器相適應。如使用紫外檢測器，則應使用對紫外吸收較低的溶劑配制。其沸點不可以太低，否則容易產生氣泡，導致實驗無法進行。因此，本發明提供的檢測方法中，采用乙腈和酸水作為流動相，其中乙腈作為流動相的A相，酸水為流動相的B相。

作為優選，流動相B相采用的酸水中酸為磷酸。

作為優選，流動相B相采用的酸水中酸的體積百分數為0.2%。

優選的，流動相B相采用體積百分數為0.2%的磷酸水溶液。

作為優選，檢測采用紫外檢測器。

作為優選，醇類為甲醇。