[發明專利]一種短肽及其衍生物作為模板分子的應用及基于印跡技術制備血管緊張素合成受體的方法

有效

• 申請號: 201310318795.6
• 申請日: 2013-07-26
• 公開（公告）號: CN103408696A
• 公開（公告）日: 2013-11-27
• 發明（設計）人: 湯又文;余澤榮;徐志廣
• 申請（專利權）人: 華南師范大學
• 主分類號: C08F220/54
• 分類號: C08F220/54;C08F220/06;C08J9/26;B01J20/26;B01J20/30
• 代理公司: 廣州粵高專利商標代理有限公司 44102
• 代理人: 江裕強

1.一種短肽及其衍生物作為模板分子的應用，其特征是用于以印跡技術制備血管緊張素合成受體，所述模板分子包括血管緊張素Ⅱ的氮端或碳端的任何一段肽鍵及其衍生物、或血管緊張素Ⅰ的氮端或碳端的任何一段肽鍵及其衍生物中的一種。

2.基于印跡技術制備血管緊張素合成受體的方法，其特征包括如下步驟：

????（1）利用包括血管緊張素Ⅱ的氮端或碳端的任何一段肽鍵及其衍生物、或血管緊張素Ⅰ的氮端或碳端的任何一段肽鍵及其衍生物中的一種作為模板分子；?

（2）將模板分子，功能單體A，凝膠骨架單體溶解于蒸餾水中得溶液1；將功能單體B溶解于無水乙醇中得溶液2；將溶液2混合到上述溶液1中，振蕩預作用，得溶液3；

（3）將交聯劑單體及表面活性劑十二烷基硫酸鈉加到步驟（2）的溶液3中，通氮氣15～60min，加入引發劑，封口，氮氣氛圍反應，得到分子印跡納米凝膠；

（4）印跡聚合物的純化：將步驟（3）中得到的分子印跡納米凝膠轉入透析袋中，在蒸餾水中進行透析，透析后冷凍干燥，得到納米凝膠受體即血管緊張素合成受體。

3.如權利要求2所述的方法，其特征在于：步驟（1）中所述模板分子包括以下（1）血管緊張素Ⅱ的C端三肽衍生物模板（Ac-His-Pro-Phe），（2）血管緊張素Ⅰ的C端三肽衍生物模板（Ac-Phe-His-Leu），（3）血管緊張素Ⅱ的N端三肽衍生物模板（Asp-Arg-Val-NHC₂H₅），（4）血管緊張素Ⅱ的N端一肽衍生物模板（Asp-NHC₂H₅），（5）血管緊張素Ⅱ的C端二肽衍生物模板（Ac-Pro-Phe），（6）血管緊張素Ⅱ的N端五肽衍生物模板（Asp-Arg-Val-Tyr-Ile-NHC₂H₅）中的一種以上。

4.如權利要求2所述的方法，其特征在于：步驟（2）中所述功能單體A為丙烯酸，所述凝膠骨架單體為N-異丙基丙烯酰胺，所述功能單體B為N-叔丁基丙烯酰胺。

5.如權利要求2所述的方法，其特征在于：步驟（2）中，模板分子、功能單體A、凝膠骨架單體與蒸餾水的摩爾比例為1:（7～9）:（11～18）:?2780；所述模板分子、功能單體A、功能單體B三種物質的摩爾比為：模板分子︰功能單體A︰功能單體B＝1︰（7～9）︰（1.6～9）；所述溶液3中三種單體總濃度為5.9～9.8mM,其中各單體濃度比為功能單體A︰功能單體B︰骨架單體=1:（0.17～1）︰（1.3～2.1）。

6.如權利要求2所述的方法，其特征在于：步驟（2）中所述所述的無水乙醇體積為溶液1中體積的2%～5%；所采用各種試劑的純度均為分析純及以上，蒸餾水為二次重蒸水；振蕩預作用的時間為4-6小時。

7.如權利要求2所述的方法，其特征在于：步驟（2）及（3）中，功能單體A、功能單體B、骨架單體及交聯單體共四種單體在溶液3中總濃度為6～10mM,其中交聯劑單體濃度為總濃度2%～4%，功能單體B濃度為總濃度5%～30%，功能單體A濃度為總濃度30%；所述氮氣氛圍反應的溫度為23～25℃，反應時間為24～36小時。

8.如權利要求2所述的方法，其特征在于：步驟（3）中所述交聯劑單體為N，N-甲叉雙丙烯酰胺，其濃度為步驟（2）中三種單體總濃度的2%～4%；所述引發劑為過硫酸銨與N,N,N,N-四甲基二乙胺組合，兩者加入后在溶液3中的濃度分別為0.6～1.0mg/mL,0.24～0.48mg/mL；所述表面活性劑十二烷基硫酸鈉加入后在溶液3中的濃度為0.2～0.4mg/mL。

9.如權利要求2所述的方法，其特征在于：步驟（4）中所述透析袋規格為MWCO?10000，透析袋截留分子量為10000；所述透析時間至少四天，每天至少換兩次水；所述冷凍干燥時間為2-3天。

10.由權利要求1~9所述方法或應用所得到的血管緊張素合成受體。