[發明專利]抗炎蛋白TIPE2在制備治療動脈粥樣硬化的藥物中的應用

有效

• 申請號: 201310317259.4
• 申請日: 2013-07-25
• 公開（公告）號: CN103463620A
• 公開（公告）日: 2013-12-25
• 發明（設計）人: 劉素俠;邵潔;章桂忠
• 申請（專利權）人: 山東大學
• 主分類號: A61K38/17
• 分類號: A61K38/17;A61P9/10;A61P7/02;A61P9/00;C12N15/861;C12N15/66
• 代理公司: 濟南圣達知識產權代理有限公司 37221
• 代理人: 彭成

1.抗炎蛋白TIPE2在制備治療動脈粥樣硬化性疾病的藥物中的應用。

2.根據權利要求1所述的應用，其特征在于：所述動脈粥樣硬化性疾病是以動脈粥樣硬化斑塊形成為病理學基礎的心腦血管疾病。

3.根據權利要求1或2所述的應用，其特征在于：所述動脈粥樣硬化性疾病包括急性冠脈綜合征、心絞痛、腦中風、血栓形成、血管閉塞、腦缺血等疾病。

4.一種表達TIPE2的重組腺病毒，其特征在于：是通過以下制備方法得到的：

BamH?I?and?Xho?I雙酶切pRK5-TIPE2質粒及pShuttle-GFP-CMV穿梭質粒，回收TIPE2目的片段及穿梭載體，酶連獲得pShuttle-GFP-CMV-TIPE2質粒；之后用限制性內切酶I-Ceu?Ⅰ和I-Sce?Ⅰ雙酶切pADxsi骨架質粒與pShuttle-GFP-CMV-TIPE2質粒，并將目的片段與pADxsi酶連，產物轉化DH5?α進行細菌內同源重組，篩選后的陽性克隆大量擴增獲得pADxsi-GFP-CMV-TIPE2重組腺病毒質粒；

Pac?I酶切線性化重組腺病毒質粒后，用Lipofectamine?2000脂質體轉染覆蓋率80%的包裝細胞HEK293細胞，3-5d后，出現明顯噬斑；待90%的細胞出現細胞病變時，收集細胞上清，反復凍融3次以后離心收集上清，繼續感染HEK293細胞，擴增病毒，收集病毒液純化后于液氮保存。

5.權利要求以4所述的表達TIPE2的重組腺病毒的制備方法，其特征在于：步驟如下：

BamH?I?and?Xho?I雙酶切pRK5-TIPE2質粒及pShuttle-GFP-CMV穿梭質粒，回收TIPE2目的片段及穿梭載體，酶連獲得pShuttle-GFP-CMV-TIPE2質粒；之后用限制性內切酶I-Ceu?Ⅰ和I-Sce?Ⅰ雙酶切pADxsi骨架質粒與pShuttle-GFP-CMV-TIPE2質粒，并將目的片段與pADxsi酶連，產物轉化DH5?α進行細菌內同源重組，篩選后的陽性克隆大量擴增獲得pADxsi-GFP-CMV-TIPE2重組腺病毒質粒；

Pac?I酶切線性化重組腺病毒質粒后，用Lipofectamine?2000脂質體轉染覆蓋率80%的包裝細胞HEK?293細胞，3-5d后，出現明顯噬斑；待90%的細胞出現細胞病變時，收集細胞上清，反復凍融3次以后離心收集上清，繼續感染HEK?293細胞，擴增病毒，收集病毒液純化后于液氮保存。

6.權利要求以4所述的表達TIPE2的重組腺病毒在制備預防動脈粥樣硬化性疾病的藥物中的應用。

7.權利要求以4所述的表達TIPE2的重組腺病毒在制備治療動脈粥樣硬化性疾病的藥物中的應用。

8.權利要求以4所述的表達TIPE2的重組腺病毒在制備防治心腦血管疾病的藥物中的應用。

9.以權利要求4所述的表達TIPE2的重組腺病毒為基礎的TIPE2蛋白、由TIPE2衍生出的一系列肽、基因產物在制備防治心腦血管疾病的藥物中的應用。

10.以權利要求4所述的表達TIPE2的重組腺病毒為基礎的TIPE2蛋白、由TIPE2衍生出的一系列肽、基因產物在制備治療以動脈粥樣硬化斑塊形成為病理學基礎的心腦血管疾病中的應用。