[發(fā)明專(zhuān)利]用于檢測(cè)人類(lèi)細(xì)胞色素P450酶系3A5(CYP3A5)基因分型的引物組及試劑盒

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310316741.6
• 申請(qǐng)日: 2013-07-26
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN103361433A
• 公開(kāi)（公告）日: 2013-10-23
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 趙衛(wèi)軍
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 天津市秀鵬生物技術(shù)開(kāi)發(fā)有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): C12Q1/68
• 分類(lèi)號(hào): C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種用于檢測(cè)CYP3A5基因分型的試劑盒。

背景技術(shù)

CYP3A5基因位于人類(lèi)7號(hào)染色體q21.1-22.1區(qū)域，基因全長(zhǎng)31.8kb，包含13個(gè)外顯子，編碼502個(gè)氨基酸。目前在中國(guó)人群中的分布主要以CYP3A5*3為主。CYP3A5*3等位基因的6986位點(diǎn)存在A＞G的變化，從而在第3內(nèi)含子中創(chuàng)造了一個(gè)隱含的受體剪接位點(diǎn)，該位點(diǎn)促使基因內(nèi)類(lèi)外顯子序列(假外顯子)插入成熟的mRNA并包括隨后外顯子的缺失(或)其基因序列的插入。這些異常的剪接導(dǎo)致若干框內(nèi)提前終止密碼子的出現(xiàn)。突變型CYP3A5的mRNA比野生型更迅速、更不穩(wěn)定，這種機(jī)制成為無(wú)義密碼子介導(dǎo)的mRNA降解，促使含PTC的mRNA降解，是集體細(xì)胞的一種保護(hù)性措施。因此，突變純合型攜帶者的總mRNA水平比另兩種攜帶者顯著減少，最終導(dǎo)致CYP3A5蛋白的不表達(dá)，使CYP3A5酶活性明顯降低甚至消失。他克莫司作為基礎(chǔ)免疫抑制劑，具有治療窗窄，個(gè)體間藥物代謝動(dòng)力學(xué)差異大的特點(diǎn)，主要由胞色素氧化酶P450(CYP)酶系中的CYP3A4和CYP3A5代謝，大量研究表明，CYP3A5*1/*1攜帶者與CYP3A5*3/*3攜帶者相比，要達(dá)到相同的他克莫司血藥濃度，需要的他克莫司劑量更高。

我國(guó)每年大概要有150萬(wàn)名患者要進(jìn)行器官移植，而他克莫司是在器官移植后使用的預(yù)防排斥反應(yīng)的主要免疫抑制劑類(lèi)藥物之一。他克莫司作為一種強(qiáng)有效的免疫抑制劑，其治療指數(shù)很窄，個(gè)體差異較大，故臨床不良反應(yīng)比較明顯，其中最主要的是腎毒害和神經(jīng)中毒，所有根據(jù)患者的具體情況制定合理的個(gè)體化、安全化治療方案來(lái)降低不良反應(yīng)的發(fā)生具有很大的必要性。研究表明，CYP3A5是他克莫司代謝的主要酶，其對(duì)他克莫司的代謝程度直接影響他克莫司在患者體內(nèi)的血藥濃度，從而影響治療的效果，而CYP3A5的基因多態(tài)性影響CYP3A5酶活性的表達(dá)。目前，參考文獻(xiàn)報(bào)道在中國(guó)人群內(nèi)僅發(fā)現(xiàn)CYP3A5*3突變型，但是頻率高達(dá)75％。因此在臨床中檢測(cè)CYP3A5基因分型對(duì)實(shí)現(xiàn)個(gè)體化用藥和安全用藥具有很好的指導(dǎo)作用。當(dāng)今，關(guān)于CYP3A5基因分型的檢測(cè)多采用測(cè)序和PCR-RFLP方法，但這兩種方法均存在一定的局限性。

基于CYP3A5基因在中國(guó)人群分布的特點(diǎn)以及目前CYP3A5基因分型研究方法的局限性，開(kāi)發(fā)建立了【CYP3A5基因測(cè)定試劑盒(PCR-SSP)】主要用于檢測(cè)CYP3A5基因分型，為實(shí)現(xiàn)個(gè)體化用藥和安全用藥具有很好的指導(dǎo)作用。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是克服現(xiàn)有技術(shù)中的不足，提供一種用于檢測(cè)CYP3A5基因分型的引物組。

本發(fā)明的第二個(gè)目的是：提供一種用于靈敏、特異、經(jīng)濟(jì)、簡(jiǎn)便、快速的特點(diǎn)的用于檢測(cè)CYP3A5基因分型的試劑盒。

一種用于檢測(cè)人類(lèi)細(xì)胞色素P450酶系3A5(CYP3A5)基因分型的引物組，其特征包括CY3A5*1引物對(duì)、CY3A5*2引物對(duì)、CY3A5*3引物對(duì)、CY3A5*4引物對(duì)、CY3A5*5引物對(duì)、CY3A5*6引物對(duì)及內(nèi)參引物對(duì)。

所述CY3A5*1共包括5對(duì)引物對(duì)：第1對(duì)的上、下游引物分別是序列表中SEQ?ID?NO.1與SEQ?ID?NO.3所示的核苷酸序列；第2對(duì)的上、下游引物分別是序列表中SEQ?ID?NO.4與SEQ?ID?NO.6所示的核苷酸序列；第3對(duì)的上、下游引物分別是序列表中SEQ?ID?NO.7與SEQ?ID?NO.9所示的核苷酸序列；第4對(duì)的上、下游引物分別是序列表中SEQ?ID?NO.10與SEQ?ID?NO.12所示的核苷酸序列；第5對(duì)的上、下游引物分別是序列表中SEQ?ID?NO.13與SEQ?ID?NO.15所示的核苷酸序列；

所述CY3A5*2引物對(duì)的上、下游引物分別是序列表中SEQ?ID?NO.2、SEQ?ID?NO.3所示的核苷酸序列；

所述CY3A5*3引物對(duì)的上、下游引物分別是序列表中SEQ?ID?NO.5、SEQ?ID?NO.6所示的核苷酸序列；

所述CY3A5*4引物對(duì)的上、下游引物分別是序列表中SEQ?ID?NO.8、SEQ?ID?NO.9所示的核苷酸序列；

所述CY3A5*5引物對(duì)的上、下游引物分別是序列表中SEQ?ID?NO.11、SEQ?ID?NO.12所示的核苷酸序列；

所述CY3A5*6引物對(duì)的上、下游引物分別是序列表中SEQ?ID?NO.14、SEQ?ID?NO.15所示的核苷酸序列。