[發明專利]核苷酸mts90及其在結核病診斷中的用途

有效

• 申請號: 201310314914.0
• 申請日: 2013-07-24
• 公開（公告）號: CN103382473A
• 公開（公告）日: 2013-11-06
• 發明（設計）人: 胥文春;趙家寧;尹一兵;張雪梅;何於娟;王虹
• 申請（專利權）人: 重慶醫科大學
• 主分類號: C12N15/11
• 分類號: C12N15/11;C12Q1/68;C12Q1/04
• 代理公司: 重慶華科專利事務所 50123
• 代理人: 夏洪

技術領域

本發明屬于分子生物學技術領域，具體涉及核苷酸mts90及其在結核病診斷中的用途。

背景技術

結核病是一種嚴重危害人類健康的慢性傳染病，目前全球有約20億人被感染，每年新出現結核病患者約800萬～1000萬，每年因結核病死亡人數約為200萬～300萬。根據世界衛生組織的統計，我國是全球22個結核病流行嚴重的國家之一，同時也是全球27個耐多藥結核病流行嚴重的國家之一。目前我國結核病年發病人數約為130萬，占全球發病的14.3%，僅次于印度位居全球第2位。據全國第五次結核流行病學調查結果，我國肺結核患病率雖有所下降，但耐多藥結核病例的危害卻日益凸顯。而控制耐藥、控制結核傳播的關鍵就是早期準確診斷。

人結核病的致病菌包括人型結核分枝桿菌、牛分枝桿菌、非洲分枝桿菌、鼠分枝桿菌、M.cannettii等，這些分枝桿菌統稱為結核分枝桿菌復合體。其中，人型結核分枝桿菌是引起人類結核病的主要病原體，約占90%～95%。其次為牛結核分枝桿菌。由于人型結核分枝桿菌對吡嗪酰胺敏感，而牛結核分枝桿菌對其天然耐藥，因此鑒定結核分枝桿菌的種類對于結核病的診斷和治療具有重要意義。

目前結核病的診斷主要依賴于對病原體的檢查，常用方法為涂片染色鏡檢、分離培養、免疫學診斷和基因診斷等。其中，分離培養法是目前診斷結核的金標準，但培養需要4～8周的時間，延誤臨床診斷與治療。涂片染色鏡檢法操作簡單，快速，但該法靈敏度低、特異性差。免疫學診斷則由于現有的抗原或抗體與其它微生物存在交叉，導致其特異性較差、假陽性率高。基因診斷快速、靈敏，且利用特異性的DNA片段可以區分結核分枝桿菌復合體內的種類。

目前用于結核鑒定的分子標志物有：16srRNA，IS1081,IS6110，hsp65，IS986，hupB，mtp40，SCAR，缺失區（RD）等。其中，16srRNA，IS1081,IS6110，hsp65，IS986能夠特異性鑒定結核分枝桿菌復合體，但不能精細區分結核分枝桿菌復合體內的分枝桿菌種類。HupB能夠區分人型結核分枝桿菌和牛結核分枝桿菌，但其區分需要依賴擴增后片段長度的差異。Mtp40旨在鑒定人型結核分枝桿菌，但不能鑒定mtp40缺失的人型結核分枝桿菌(有部分結核分枝桿菌缺失mtp40片段)，也不能有效區分結核分枝桿菌復合體中的田鼠分枝桿菌、非洲分枝桿菌、M.cannettii。SCAR在檢測人型結核分枝桿菌時，與非洲分枝桿菌有交叉。而本發明可特異性的鑒別人型結核分枝桿菌與其他分枝桿菌，為人型結核分枝桿菌的鑒定提供了一個特異性強、保守性好的分子標志物。

發明內容

本發明要解決的技術問題是為人型結核分枝桿菌的鑒定和結核病的診斷提供一種新的選擇。

本發明的技術方案是核苷酸mts90，具有如下特征，（a）其序列如SEQ?ID?NO.1所示；或（b）任何含有（a）中連續15bp以上的核苷酸。

SEQ?ID?NO.1：

GTGACGCAAACCGGCAAGCGTCAGAGACGCAAATTCGGTCGCATCCGA，斜體所示42bp為非編碼區，下劃線所示48bp為編碼區。

本發明還提供了檢測人型結核分枝桿菌的試劑，主要成分為核苷酸mts90。

進一步的，其成分還包括擴增mts90的引物對，引物對的序列如SEQ?ID?NO.2和SEQ?ID?NO.3，SEQ?ID?NO.4和SEQ?ID?NO.5或者SEQ?ID?NO.7和SEQ?ID?NO.8中任意一對所示。

本發明還提供了檢測人型結核分枝桿菌的試劑盒，包括核苷酸mts90。

進一步的，還包括擴增mts90的引物對，引物對的序列如SEQ?ID?NO.2和SEQ?ID?NO.3，SEQ?ID?NO.4和SEQ?ID?NO.5，或者SEQ?ID?NO.7和SEQ?ID?NO.8中任意一對所示。

本發明還提供了核苷酸mts90在檢測人型結核分枝桿菌中的用途。

本發明還提供了核苷酸mts90在制備檢測人型結核分枝桿菌的試劑中的用途。

本發明還提供了核苷酸mts90在制備檢測人型結核分枝桿菌的試劑盒中的用途。