[發明專利]一種石油烴降解菌耐鹽特性微量化檢測試劑盒

無效

• 申請號: 201310305544.4
• 申請日: 2013-07-19
• 公開（公告）號: CN103589774A
• 公開（公告）日: 2014-02-19
• 發明（設計）人: 王新新;吳亮;譚耀模;楊勇;亓俊良;安偉;牛志剛;陳宇
• 申請（專利權）人: 中國海洋石油總公司;中海油能源發展股份有限公司;中海石油環保服務（天津）有限公司
• 主分類號: C12Q1/04
• 分類號: C12Q1/04;C12R1/01
• 代理公司: 天津市北洋有限責任專利代理事務所 12201
• 代理人: 陸藝

技術領域

本發明屬于環境微生物檢測技術領域，涉及一種石油烴降解菌耐鹽特性微量化檢測試劑盒。

技術背景

大多數石油污染通常發生在高鹽環境中，例如石油污染鹽漬化土壤、石油污染海水和石油污染高鹽廢水等。目前，石油污染高鹽環境的治理已經引起人們的重視，特別是采用添加石油烴降解菌的生物方法是一種治理石油污染高鹽環境的有效策略。其中，石油烴降解菌的耐鹽特性是影響治理效果的關鍵。只有耐鹽性較好的石油烴降解菌才能在高鹽環境中生存，從而進一步降解石油烴，消除石油污染。因此，石油烴降解菌的耐鹽特性是考察其是否能應用于石油污染高鹽環境治理的重要特征。

目前用于檢測石油烴降解菌耐鹽特性的方法主要是搖瓶檢測法。通常需要配制10～100ml含有不同濃度NaCl的液體培養基，接入待測的石油烴降解菌，經過一定時間的培養，通過測定菌體濃度的變化來判斷石油烴降解菌的耐鹽特性。該方法操作過程較為繁瑣、試劑消耗量大、占用設備空間大，產生的測試廢液較多，并且通量較低。采用高通量的微量化測定試劑盒是解決這一問題的有效途徑。目前，微量化測定試劑盒已經廣泛應用于多種指標的測定。例如：中國專利（201020629009）公布了一種采用微孔板檢測飼用植酸酶活性試劑盒，以微孔板為反應載體，結構簡便、使用方便，大大了提高工作效率，實現了大量樣品的同時測定；中國專利（201220134074）公布了一種羥基維生素D檢測試劑盒，微孔內包被有高特異性鼠羥基維生素D單克隆抗體層，提高了測定的線性范圍；美國專利（US6428974B1）公布了一種用于抗菌藥品測試的微孔板，具有操作簡單、重復性好的優點；歐洲專利（EP1865074B1）公布了一種用于反轉錄PCR的微孔板，大大簡化了反轉錄PCR的操作。因此，采用微量化測定試劑盒檢測石油烴降解菌的耐鹽特性具有較強的技術可行性。然而，目前國內外并沒有石油烴降解菌耐鹽特性微量化檢測試劑盒的相關專利。

發明內容

針對石油烴降解菌耐鹽特性傳統檢測方法操作過程較為繁瑣等缺陷，本發明的目的是提供一種操作過程簡單、試劑消耗量少、占用設備空間小、測試廢液少和通量高的石油烴降解菌耐鹽特性微量化檢測試劑盒。

本發明的技術方案概述如下：

一種石油烴降解菌耐鹽特性微量化檢測試劑盒，包括96微孔板和顯色劑，所述96微孔板的孔中設置有原油和NaCl晶體，所述原油的量為1～10mg/孔，所述NaCl晶體在每孔中的質量不同，NaCl晶體的質量在微孔中在1mg-51mg范圍呈質量梯度遞增設置，或在10mg-100mg范圍呈質量梯度遞增設置，所述顯色劑是質量百分濃度為0.1%～1%的碘硝基四氮唑水溶液。

所述原油的量優選為5mg/孔。

優選的是：NaCl晶體的質量在微孔中在1mg-51mg范圍呈質量梯度遞增設置為1mg、6mg、11mg、16mg、21mg、26mg、31mg、36mg、41mg、46mg和51mg或1mg、11mg、21mg、31mg、41mg和51mg。

優選的是：NaCl晶體的質量在微孔中在10mg-100mg范圍呈質量梯度遞增設置為10mg、20mg、30mg、40mg、50mg、60mg、70mg、80mg、90mg和100mg或10mg、15mg、20mg、25mg、30mg、35mg、40mg、45mg、50mg、55mg、60mg、65mg、70mg、75mg、80mg、85mg、90mg、95mg和100mg。

優選的是：顯色劑是質量百分濃度為0.5%的碘硝基四氮唑水溶液。

本發明的優點：

①操作過程簡單，僅需要稀釋石油烴降解菌等操作；

②試劑消耗量少，檢測一個樣品僅需幾毫升試劑；

③占用設備空間小，檢測一個樣品僅占用約0.1L的培養箱體積；

④試廢液少，檢測一個樣品僅產生幾毫升廢液；

⑤通量高，可同時測定數十組石油烴降解菌。

具體實施方式

本發明提供一種石油烴降解菌耐鹽特性微量化檢測試劑盒原理為：將石油烴降解菌用BH培養基等無機鹽培養基稀釋，加入到本發明試劑盒的96微孔板的微孔中。由于96微孔板的不同的孔中設置有原油和不同重量的NaCl晶體，因此形成了不同鹽濃度的培養基。石油烴降解菌培養過程中僅在合適的鹽濃度下生長，其生長情況可以通過添加顯色劑碘硝基四氮唑后觀察其顏色變化來測定。