[發明專利]檢測纖維二糖酶抑制劑的方法

有效

• 申請號: 201310302482.1
• 申請日: 2013-07-18
• 公開（公告）號: CN103411928A
• 公開（公告）日: 2013-11-27
• 發明（設計）人: 黃丹蓮;劉亮;曾光明;賴萃;張辰;許飄;趙美花;黃超;李寧杰;李雪
• 申請（專利權）人: 湖南大學
• 主分類號: G01N21/55
• 分類號: G01N21/55;C12Q1/34
• 代理公司: 湖南兆弘專利事務所 43008
• 代理人: 趙洪

1.一種檢測纖維二糖酶抑制劑的方法，該方法包括以下步驟：將一種用于檢測纖維二糖酶活性的納米金探針溶液加入含待測物質的纖維二糖酶溶液中，所述納米金探針溶液與所述纖維二糖酶溶液的體積比為20∶1，其中每20體積的納米金探針溶液中含有2～4體積的納米金探針濃縮液，將檢測溫度控制在30℃～35℃，檢測pH值控制在4.0～4.5，待納米金探針反應完全后，檢測含待測物質的溶液體系中納米金探針表面等離子體共振吸收峰強度變化，得到吸收峰在620nm處的吸光度與520nm處的吸光度比值A620/A520，設為A₂；同等條件下，將所述納米金探針溶液加入不含待測物質的纖維二糖酶溶液中，檢測不含待測物質的溶液體系中納米金探針表面等離子體共振吸收峰強度變化，得到吸收峰在620nm處的吸光度與520nm處的吸光度比值A620/A520，設為A₁；比較A₂和A₁的大小，即可判斷待測物質是否為纖維二糖酶抑制劑；

當A₂＜A₁時，表明待測物質為纖維二糖酶抑制劑，所述纖維二糖酶抑制劑對纖維二糖酶活性的抑制率計算方程為：

I=1-C2/C1=(1-10A2-A10.3642)×100%]]>

其中，I為纖維二糖酶抑制劑對纖維二糖酶活性的抑制率，C₁為不含纖維二糖酶抑制劑時纖維二糖酶的活性數值，C₂為含纖維二糖酶抑制劑時纖維二糖酶的活性數值；

所述納米金探針包括納米金顆粒，所述納米金顆粒上修飾有纖維二糖和6-巰基己-1-醇。

2.根據權利要求1所述的檢測纖維二糖酶抑制劑的方法，其特征在于：所述納米金探針的粒徑為40nm～60nm。

3.根據權利要求1所述的檢測纖維二糖酶抑制劑的方法，其特征在于：所述納米金探針的Zeta電位為-30mV～-40mV。

4.根據權利要求1～3中任一項所述的檢測纖維二糖酶抑制劑的方法，其特征在于，所述納米金探針主要由以下方法制備得到：在配好的纖維二糖溶液中加入氯金酸溶液和硼氫化鈉溶液，充分混勻且反應完全后，將得到的反應產物低速離心純化以去除沉積顆粒，再于上清液中加入6-巰基己-1-醇進行培養，培養完成后高速離心純化，將高速離心后的沉淀重溶于超純水中，得到含有用于檢測纖維二糖酶活性的納米金探針的溶液。

5.根據權利要求4所述的檢測纖維二糖酶抑制劑的方法，其特征在于：所述氯金酸、硼氫化鈉、纖維二糖的摩爾用量比為1∶（16.3～18.4）∶（1.2～6）。

6.根據權利要求4所述的檢測纖維二糖酶抑制劑的方法，其特征在于：所述氯金酸與6-巰基己-1-醇的摩爾用量比為1∶（0.002～0.004）。

7.根據權利要求4所述的檢測纖維二糖酶抑制劑的方法：所述加入6-巰基己-1-醇進行培養時的溫度控制在30℃～37℃，培養時間為2h～2.5h。

8.根據權利要求4所述的檢測纖維二糖酶抑制劑的方法，其特征在于：所述低速離心時的轉速為1200rpm～1500rpm，所述高速離心時的轉速為12000rpm～15000rp。