[發明專利]擴張型心肌病斑馬魚疾病模型的建立與應用有效

申請號：	201310294525.6	申請日：	2013-07-12
公開（公告）號：	CN104274464A	公開（公告）日：	2015-01-14
發明（設計）人：	周勇;高磊;鄧敏;陳漪	申請（專利權）人：	中國科學院上海生命科學研究院
主分類號：	A61K31/519	分類號：	A61K31/519;A61K38/00;A61P9/04
代理公司：	上海專利商標事務所有限公司 31100	代理人：	陳靜
地址：	200031 ***	國省代碼：	上海;31
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摘要：
搜索關鍵詞：	擴張型心肌斑馬疾病模型建立應用
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【說明書】：

技術領域

本發明屬于醫藥技術領域，更具體地，本發明涉及一種肌小節缺陷致擴張型心肌病的斑馬魚模型的建立及其應用。

背景技術

擴張型先天性心肌病(Congenital?Dilated?CardioMyopathy，CDCM)是一類主要的先天心肌病，臨床表現為左心室或者雙側心室擴張，伴隨正性肌力下降。兒童預后五年內致死率達80%，幸存者也會患有后遺疾病或需心臟移植。成人中先天性基因變異所致DCM外顯率在40歲后達95%，死亡率仍然很高(發病后平均存活時間男性1.7年，女性3.2年)，其致殘致畸率在各種疾病及綜合征內也居于首位。

心肌細胞肌小節缺陷是CDCM主要的發病原因之一。Titin(TTN)是組裝肌小節和紋狀肌的必要蛋白，提供正性肌力，調節收縮壓。TTN蛋白是人類蛋白組中最大的一個，它含有大約33，000個氨基酸，是含量第三大的紋狀肌蛋白。生理狀態下，兩個TTN分子結合形成大約2μm寬的肌小節，錨定于Z-line和M-line。2012年發表于新英格蘭醫學雜志的研究報道了在312例擴張型心肌病(Dilated?CardioMyopathy，DCM)中發現72例發生TTN突變，并顯示TTN截短型突變是遺傳性DCM極其重要的病因，其在家族性擴張型心肌病家族發病率約占25%，散發病例約為18%。TTN基因在轉錄過程中可以進行可變剪切，產生不同的轉錄本，其中含有N2B結構域的轉錄本是在心肌細胞中特異表達的，可見N2B結構域在心肌的正常發育和病理發生發揮一定的作用。明確TTN功能變異有助于提高對DCM病理生理認識，從而幫助DCM患者能夠得到早期診斷、干預和治療。

目前，對于DCM的病理和治療研究由于缺乏合適的動物模型而進展緩慢。盡管國際上有部分用于心衰研究的小鼠模型，但主要集中于beta-腎上腺素受體活性調控方面，無法模擬先天性心肌肌力缺陷這一主要心肌病的表征。

因此，本領域亟待開發一種用于DCM研究的動物模型，以便深入探討新的治療方案，在一定程度上替代心臟移植或提高預后生存率。

發明內容

本發明的目的在于提供擴張型心肌病斑馬魚疾病模型的建立與應用。

在本發明的第一方面，提供一種篩選治療擴張型心肌病或心力衰竭的潛在藥物的方法，所述方法包括：

(1)提供斑馬魚titin-/-突變型胚胎；

(2)按照受精后時間計算，從受精后20±2小時開始用候選藥物處理(1)的胚胎；

(3)至胚胎受精后32±2小時，48±2小時，分別觀測斑馬魚胚胎的表型；

其中，若胚胎受精后48±2小時心臟博動頻率顯著增加，則所述的候選藥物是治療擴張型心肌病或心力衰竭的潛在藥物；或

若胚胎受精后32±2小時，心包腫大程度顯著緩解，心臟早期舒張、收縮能力顯著加強或心臟縮小程度降低或血液循環顯著改善，則所述的候選藥物是治療擴張型心肌病或心力衰竭的潛在藥物。

在一個優選例中，所述的方法中，步驟(2)包括：在測試組中，從受精后20±2小時開始用候選藥物處理(1)的胚胎；和/或

步驟(3)包括：觀測斑馬魚胚胎的表型，并與對照組比較，其中所述的對照組是不用所述候選藥物處理的、同步發育的斑馬魚titin-/-突變型胚胎；