[發明專利]一種檢測室內空氣急性暴露免疫毒性方法

無效

• 申請號: 201310291553.2
• 申請日: 2013-07-11
• 公開（公告）號: CN103336097A
• 公開（公告）日: 2013-10-02
• 發明（設計）人: 劉薇;王凡;李崇磊;金一和
• 申請（專利權）人: 大連理工大學
• 主分類號: G01N33/00
• 分類號: G01N33/00;G01N33/53
• 代理公司: 大連理工大學專利中心 21200
• 代理人: 梅洪玉

技術領域

本發明涉及一種室內污染空氣毒性的評價方法，具體涉及到一種利用淋巴細胞亞群檢測試驗使室內空氣免疫毒性可以定量檢測的方法。

背景技術

為了保障室內空氣的安全，降低室內裝潢、裝飾所帶來的威脅，人民常用各種方法對室內空氣進行評價，以有效的方法掌握室內空氣引起的健康風險。

常用檢測免疫毒性的方法有，免疫病理學檢查、超敏反應檢測、細胞因子檢測、和免疫功能檢測，免疫器官的淋巴細胞亞群檢測是一種免疫功能檢測，用流式細胞儀檢測淋巴細胞亞群是近些年來檢測免疫毒性的新技術，具有敏感、簡便、所需樣品少等優點。得到了廣泛的應用，相對于病理學、超敏反應和細胞因子檢測具有一定的優勢，雖然淋巴細胞亞群檢測早已作為規范性方法，但用流式細胞儀檢測淋巴細胞亞群的試驗方法和結果分析仍需進一步的標準化，且毒性反應不夠直觀，因此尋找一種直觀、明確、結果易于統一的方法對室內空氣毒性進行檢測是室內空氣毒性物質的定量化評價發展的要求。

發明內容

本發明針對現有室內空氣免疫毒性檢測方法的不足，提供了一種淋巴細胞亞群試驗檢測空氣免疫毒性的方法，該方法將VOCs作為標準毒性物質，在評價室內空氣在免疫毒性時以VOCs濃度表示室內空氣的免疫毒性，實現了室內空氣毒性評價的定量化，而且檢測結果更加直觀、明確、易于統一，為室內空氣進行定量化評價提供有力的支持。

本發明選則復合VOCs作為標準毒性物質，甲醛、苯是世界衛生組織致癌物質名單中的兩種，甲苯、二甲苯在室內空氣中也較為常見，也能夠增加致癌性，現行室內空氣標準分別為：0.10mg/m3、0.11mg/m3、0.20mg/m3、0.20mg/m3。因此用復合VOCs濃度表示室內空氣毒性結果易于統一。其操作為：用小鼠在不同濃度下的復合VOCs進行染毒，以復合VOCs濃度為橫坐標，以CD4+/CD8+為縱坐標繪制標準曲線，然后用小鼠在待測空氣中染毒，得出小鼠脾的CD4+/CD8+，帶入到標準曲線。就得到了VOCs濃度表示的室內空氣毒性。這種方法避免了其他試驗因素所產生的影響，是室內空氣毒性更加準確，檢測結果更易于統一。

為了解決上述技術問題，本發明采用如下步驟

一種單細胞凝膠電泳試驗檢測室內空氣免疫毒性的方法，其特征至少包括以下步驟：

（a）將小鼠放入到合適濃度的VOCs中進行連續10天的染毒處理，每天2小時；

（b）脾單細胞懸液的制備：小鼠脾臟用注射器芯輕輕研磨或用小剪刀輕輕剪碎，加入到含2mL2%的小牛血清的PBS中，然后過200目濾網，剩余液體在1,200rpm下離心10min。經0.17moL/L的NH4Cl紅細胞裂解液裂解紅細胞10min，1,200rpm離心5min，棄上清，用2mL?PBS洗滌兩遍，棄上清，然后用臺盼藍染色確定脾細胞的活性超過90%，最后用2%熱滅活FCS的PBS調節細胞數為2-10×106/mL/管；

（c）染色：在上述單細胞懸液管中加入熒光抗體anti-CD3-FITC、anti-CD4-PE或者anti-CD8-PERCP、anti-CD4-PE室溫避光孵育30min；

（d）重懸：用PBS重懸細胞，避光保存；

（e）上機檢測：建立CD3/CD4、CD8/B220散點圖并設置為顯示G3=R1*R2門內的細胞，獲取細胞總數10000個，根據同型對照設十字門分析TH(CD3+CD4+)和Ts(B220+CD8+)細胞的表達情況；

（f）計算CD4+/CD8+，以VOCs濃度為橫坐標，以CD4+/CD8+為縱坐標，繪制CD4+/CD8+對VOCs濃度的標準曲線；

（g）將小鼠放入到待測室內空氣進行連續10天的染毒處理，每天2小時；

（h）然后按照b-e步驟對小鼠脾進行淋巴細胞亞群的檢測，并計算出CD4+/CD8+；

（i）用待測室內空氣的CD4+/CD8+帶入到上述標準曲線，即可得到以VOCs濃度表示待測室內空氣毒性；

所述的待測室內空氣毒性小于室內空氣質量標準100倍的VOCs的毒性。

本發明選擇復合VOCs為表準毒性物質，通過復合VOCs對CD4+/CD8+的曲線實現了室內空氣毒性的定量化評價，本發明的方法更加直觀，準確的檢測室內空氣的免疫毒性，結果易于統一，重現性較好，能夠對室內空氣污染狀況作出判斷，為室內空氣污染和設備的研發提供支持，降低由于室內空氣污染而導致的人類的致癌風險。

附圖說明

附圖為脾細胞的CD4+T/CD8+T與室內空氣污染水平之間的關系圖。