[發明專利]厭氧產電菌分離及電化學活性鑒定方法

在審

• 申請號: 201310284254.6
• 申請日: 2013-07-08
• 公開（公告）號: CN104277991A
• 公開（公告）日: 2015-01-14
• 發明（設計）人: 朱葛夫;鄒然;劉超翔
• 申請（專利權）人: 中國科學院城市環境研究所
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;G01N27/48
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種厭氧產電菌的分離及電化學活性方法，其特征在于產電菌的分離按以下步驟進行：在無菌無氧條件下，剪下微生物電解池陽極膜，投入含滅菌除氧的液體培養基的厭氧瓶中，置于培養箱中培養；取上步驟中1ml菌液進行倍比稀釋，選擇合適的梯度稀釋菌液注入有瓊脂粉培養基的厭氧管中，平放在浸有冷水的滾管機中快速滾動，待培養基在厭氧管內管壁冷凝形成均勻的薄層，用封口膜密封厭氧管管蓋的外側，置于培養箱中培養；挑取上步驟中厭氧管中的單菌落于有培養基的厭氧瓶中擴大培養；重復哼蓋特滾管和擴大培養，直至厭氧管中形成形態大小一致的單一菌落。

2.根據權利要求1，培養基A的組成為：胰蛋白胨4.0?g/l、牛肉浸膏4.0?g/l、酵母1.0?g/l、CaCL₂?0.2?g/l?、NaCL?5.0?g/l、乙酸鈉16.0?g/l、FeSO₄.7H₂O?0.2?g/l、MgCL₂?0.2?g/l、K₂HPO_4?1.2?g/l、半胱氨酸1.0?g/l、0.1%（w/v）的刃天青0.4?mL/L；培養基B的組成為：檸檬酸鐵5.0?mmol/L、M液和V液各5?mL/L；厭氧管的培養基除A和B后外加1.5?%～2.0?%的瓊脂粉；M液、V液和還原劑檸檬酸鐵采用0.22μm濾膜過濾除菌后與高溫高壓滅菌的培養基A混合。

3.根據權利要求1，剪下的陽極膜為正方形小角，面積為4mm²。

4.根據權利要求1，厭氧瓶的培養條件為30℃，培養時間為5天。

5.根據權利要求1，厭氧管滾管的滾管機為白瓷托盤，其長×寬×高=27cm×17?cm×5cm，加入冷水的體積為托盤體積的1/2。

6.根據權利要求1，菌液的稀釋倍數為10~10⁷，選擇10⁴、10⁵、10⁶和10⁷四個稀釋梯度進行滾管。

7.根據權利要求1，厭氧管在培養箱中培養時需要垂直放置，35℃培養5天。

8.根據權利要求1，哼蓋特滾管分離和擴大培養反復共四次后能成功分離出單菌落。

9.根據權利要求1，培養基A導入厭氧瓶后，外加入10%的蒸餾水，補充蒸發減少的水分體積，煮沸除氧的同時，用注射器抽真空，除氧氣操作為105℃條件下10分鐘。

10.根據權利要求1，基礎培養基通過高溫滅菌，滅菌時將厭氧反應瓶蓋子先順時針擰至最緊，后逆時針擰松90°。