[發明專利]多肽微陣列芯片在血漿中檢測凝血酶活性及篩選凝血酶抑制劑的方法

有效

• 申請號: 201310282186.X
• 申請日: 2013-07-05
• 公開（公告）號: CN103361398A
• 公開（公告）日: 2013-10-23
• 發明（設計）人: 王振新;蘇敏
• 申請（專利權）人: 中國科學院長春應用化學研究所
• 主分類號: C12Q1/56
• 分類號: C12Q1/56;G01N33/68
• 代理公司: 長春菁華專利商標代理事務所 22210
• 代理人: 王丹陽

1.多肽微陣列芯片在血漿中檢測凝血酶活性的方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)將多肽微陣列芯片與激活的血漿在36-38°C反應40min以上，得到反應后的多肽微陣列芯片；

所述多肽微陣列芯片以生物素修飾的多肽為底物，所述多肽的氨基酸序列為Cys-Ala-Glu-Gly-Gly-Gly-Val-Arg-Gly-Pro-Arg-Val-Val-Lys，Cys-Glu-Gly-Phe-Phe-Ser-Ala-Arg-Gly-His-Arg-Pro-Leu-Lys，Cys-Ala-Glu-Gly-Gly-Val-Pro-Arg-Ser-Phe-Arg-Val-Val-Lys，Cys-Ala-Glu-Gly-Gly-Phe-Pro-Arg-Ser-Phe-Arg-Val-Val-Lys，Cys-Ala-Glu-Gly-Gly-Val-Pro-Arg-Ser-Phe-Lys-Val-Val-Lys，Cys-Gly-Gly-Gly-Ala-Arg-Pro-Arg-Ser-Leu-Leu-Val-Gly-Lys，Cys-Ala-Glu-Gly-Gly-D-Phe-Pro-Arg-Ser-Phe-Arg-Val-Val-Lys或者Cys-Gly-Gly-Gly-Val-Arg-Pro-Gly-Arg-Val-Gly-Gly-Gly-Glu-Ala-Leu-Phe-Asp-Lys，其中，生物素均修飾在末端賴氨酸上，D-Phe為D型苯丙氨酸，其它氨基酸均為L型氨基酸；

(2)將反應后的多肽微陣列芯片與親和素反應1h以上，再與多肽修飾的金納米粒子反應1h以上，得到金納米粒子標記的多肽微陣列芯片；

所述多肽修飾的金納米粒子為Cys-Ala-Leu-Asn-Asn與Cys-Ala-Leu-Asn-Asn-Gly-Lys-Gly修飾的金納米粒子，其中，Lys上修飾有生物素；

(3)檢測金納米粒子標記的多肽微陣列芯片上金納米粒子的共振光散射信號，實現對凝血酶活性的檢測。

2.根據權利要求1所述的多肽微陣列芯片在血漿中檢測凝血酶活性的方法，其特征在于，所述多肽微陣列芯片的多肽點陣濃度為0.1-2mg/mL。

3.根據權利要求1所述的多肽微陣列芯片在血漿中檢測凝血酶活性的方法，其特征在于，所述多肽微陣列芯片與激活的血漿在37°C反應40min。

4.根據權利要求1所述的多肽微陣列芯片在血漿中檢測凝血酶活性的方法，其特征在于，所述親和素的濃度為3μM以上。

5.根據權利要求1所述的多肽微陣列芯片在血漿中檢測凝血酶活性的方法，其特征在于，所述多肽修飾的金納米粒子的濃度為3nM以上。

6.根據權利要求1所述的多肽微陣列芯片在血漿中檢測凝血酶活性的方法，其特征在于，所述金納米粒子的平均粒徑為25-30nm。

7.根據權利要求1所述的多肽微陣列芯片在血漿中檢測凝血酶活性的方法，其特征在于，所述激活的血漿的體積為30μL。

8.根據權利要求1所述的多肽微陣列芯片在血漿中檢測凝血酶活性的方法，其特征在于，所述激活的血漿是采用以下方法制備的：向血漿中加入稀釋緩沖液、重組人組織因子、磷脂混合物和氯化鈣。