[發明專利]一種高消化率高粱品系的分子鑒定法有效
| 申請號： | 201310281699.9 | 申請日： | 2013-07-07 |
| 公開（公告）號： | CN103305624A | 公開（公告）日： | 2013-09-18 |
| 發明（設計）人： | 李杰勤;王麗華;詹秋文;林平;王茂輝 | 申請（專利權）人： | 安徽科技學院 |
| 主分類號： | C12Q1/68 | 分類號： | C12Q1/68 |
| 代理公司： | 暫無信息 | 代理人： | 暫無信息 |
| 地址： | 233100 安徽省蚌埠*** | 國省代碼： | 安徽;34 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 消化率 高粱 品系 分子 鑒定 | ||
【權利要求書】：
1.一種高消化率高粱品系的分子鑒定法，其特征在于，它包括如下步驟：
①選用引物B-1：前引物為，GACGGCCGGCACGCG；后引物為，TTCAGACTTCAGACCAAC；
②PCR擴增：擴增程序為，94℃?預變性?5min；94℃變性?30s，58℃退火30s，68℃?延伸30s，34個循環；最后再延伸7?min，4℃保存；
③電泳檢測：取擴增好的DNA產物5μL，用2%的瓊脂糖凝膠電泳檢測，如有一條長度200bp左右的帶則說明目標序列已擴增好；
④酶切：利用DNA回收試劑盒將擴增好的溶液回收，取20μL用Mlu?I酶進行酶切；
⑤電泳檢測酶切片段：用3%的瓊脂糖凝膠電泳檢測酶切后的DNA，電壓150V，電泳30分鐘，用成像儀拍照觀察，如出現2條帶說明該單株攜帶bmr-6基因，如只有1條帶則不攜帶該基因。
2.根據權利要求1所述的高消化率高粱品系分子鑒定方法，其特征在于，步驟②中所述的PCR擴增的總體系為30μL：DNA?100ng，?2mM?引物?5μL，2?mM?DNTP?6μL，KOD酶?0.5U，2倍緩沖液15μL，剩余用雙蒸水補齊。
3.根據權利要求1所述的高消化率高粱品系分子鑒定方法，其特征在于，步驟④所述的酶切體系40μL：DNA?20μL，內切酶3μL，10倍酶切緩沖液4μL，雙蒸水13μL。
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