[發明專利]咖啡酸糖苷衍生物及其制備方法

有效

• 申請號: 201310257383.6
• 申請日: 2013-06-25
• 公開（公告）號: CN103304606A
• 公開（公告）日: 2013-09-18
• 發明（設計）人: 盧麗麗;肖敏;郭玉川
• 申請（專利權）人: 山東大學
• 主分類號: C07H15/203
• 分類號: C07H15/203;C12P19/44
• 代理公司: 濟南金迪知識產權代理有限公司 37219
• 代理人: 朱家富

1.一種咖啡酸半乳糖苷混合物，有效成分為咖啡酸3′-O-β-D-吡喃半乳糖苷和咖啡酸4′-O-β-D-吡喃半乳糖苷，分子式為C₁₅H₁₈O₉，咖啡酸3′-O-β-D-吡喃半乳糖苷的化學結構式如下：

咖啡酸4′-O-β-D-吡喃半乳糖苷的化學結構式如下：

2.如權利要求1所述的咖啡酸半乳糖苷混合物，其特征在于，所述的混合物中咖啡酸3′-O-β-D-吡喃半乳糖苷與咖啡酸4′-O-β-D-吡喃半乳糖苷的質量比為1:3。

3.權利要求1所述咖啡酸半乳糖苷混合物的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：

（1）采用磷酸緩沖液配制乳糖濃度為0.1M～0.3M，咖啡酸濃度為0.05M～0.2M，氨基酸序列如SEQ?ID?NO.1所示的β-半乳糖苷酶添加量為2μg～10μg/mL的反應體系；

（2）將步驟（1）制得反應體系于37～45℃水浴中反應20～60分鐘，煮沸終止反應，10000～12000轉/分鐘離心20分鐘，取上清液；

（3）將步驟（2）制得的上清液，經分離、干燥后，制得咖啡酸半乳糖苷。

4.如權利要求3所述的制備方法，其特征在于，所述步驟（1）中的磷酸緩沖液為濃度10～100mM，pH6～8的磷酸鉀緩沖溶液；根據本發明進一步優選的，所述步驟（1）中的緩沖液為50mM，pH7.0的磷酸鉀緩沖液。

5.如權利要求3所述的制備方法，其特征在于，所述步驟（2）中的反應條件為45℃水浴反應45分鐘。

6.如權利要求3所述的制備方法，其特征在于，所述步驟（2）中的煮沸終止反應條件為100℃煮沸5分鐘。

7.如權利要求3所述的制備方法，其特征在于，所述步驟（3）中的分離為用規格15mm?ID×100cm的Bio-gel?P2色譜柱進行色譜分離，以水為流動相，收集洗脫樣品。

8.如權利要求7所述的制備方法，其特征在于，上述色譜分離的樣品上樣量為1～2mL，洗脫流速為0.2～0.3mL/分鐘；最優的，樣品上樣量為1mL，洗脫流速為0.2mL/分鐘。

9.如權利要求3所述的制備方法，其特征在于，所述步驟（3）中的干燥為冷凍干燥。

10.如權利要求3所述的制備方法，其特征在于，所述步驟（3）中還包括分離后的薄層層析檢測、合并遷移距離相同的產物的步驟；

上述薄層層析檢測的步驟如下：

取1μL洗脫液，薄層層析板點樣，在展層劑中展開，霧噴顯色劑后，于120℃烘烤5分鐘使糖斑點顯色。

上述展層劑由正丁醇、無水乙醇和水按體積比5：3：2混合配制；顯色劑是體積百分比為20%的硫酸和濃度為0.5wt%的3,5-二羥基甲苯的溶液。