[發(fā)明專利]轉(zhuǎn)基因成分MLPA檢測的探針及制備其長探針的引物

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310253831.5
• 申請日: 2013-06-24
• 公開（公告）號: CN103397087A
• 公開（公告）日: 2013-11-20
• 發(fā)明（設計）人: 凌杏園;陳枝楠;潘廣;章桂明;向才玉;康林;程穎慧;龍海;鄭耘;陳菲
• 申請（專利權(quán)）人: 深圳出入境檢驗檢疫局動植物檢驗檢疫技術(shù)中心
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 深圳鼎合誠知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 44281
• 代理人: 彭家恩;彭愿潔

技術(shù)領(lǐng)域

本申請涉及核酸分子檢測領(lǐng)域，特別是涉及一種用于轉(zhuǎn)基因成分的MLPA檢測的探針，制備該探針引物，以及該探針的應用。

背景技術(shù)

多重連接依賴探針擴增技術(shù)(MLPA:multiplex?ligated-probes?amplification)由荷蘭的Dr．Schouten?JP于2002年報道。MLPA檢測首先要設計和制備檢測各基因位點的上下游探針；其次進行MLPA反應，該反應由連續(xù)三個步驟組成：即樣品DNA與探針雜交復性、連接酶連接反應和連接產(chǎn)物PCR擴增；最后所得MLPA擴增產(chǎn)物一般由測序儀或毛細管進行電泳分離和分析。

MLPA檢測最初應用于醫(yī)學檢測目的。該技術(shù)可以不需昂貴設備、特異性高，在醫(yī)學檢測時單管可檢測多達40多個基因或位點。MLPA法于2002年發(fā)明以來，MLPA探針設計和制備、反應體系建立和反應條件等均已相當?shù)某墒臁Ｒ褟V泛應用于染色體異常、基因點突變、基因缺失、基因甲基化、癌基因突變及mRNA表達研究等領(lǐng)域，公司MRC-Holland?b.v.已開發(fā)了135種檢測人類遺傳和腫瘤基因的試劑盒。然而，在轉(zhuǎn)基因檢測方面國外僅見Francisco?Moreano2005年等對轉(zhuǎn)基因大豆和玉米的可行性研究，國內(nèi)外尚未有轉(zhuǎn)基因成分檢測的MLPA探針及方法，也未見形成檢測試劑盒的報道。因而開展高通量的轉(zhuǎn)基因成分MLPA檢測研究具重要現(xiàn)實意義。

發(fā)明內(nèi)容

本申請的目的是提供一種新的轉(zhuǎn)基因玉米品系MLPA檢測的探針及其應用。

本申請的另一目的是提供一種適用于不對稱PCR方法制備長探針的引物，該引物能夠用于不對稱PCR方法，制備出本申請的部分長探針。

為了實現(xiàn)上述目的，本申請采用了以下技術(shù)方案：

本申請公布了一種轉(zhuǎn)基因成分MLPA檢測的探針，該探針包括第一組探針至第十一組探針中的至少一組，每組探針中分別含有長探針和短探針，長探針的5’端具有磷酸化修飾；第一組探針的長探針含有Seq?ID?No.1所示序列，短探針含有Seq?ID?No.2所示序列；第二組探針的長探針含有Seq?ID?No.3所示序列，短探針含有Seq?ID?No.4所示序列；第三組探針的長探針含有Seq?ID?No.5所示序列，短探針含有Seq?ID?No.6所示序列；第四組探針的長探針含有Seq?ID?No.7所示序列，短探針含有Seq?ID?No.8所示序列；第五組探針的長探針含有Seq?ID?No.9所示序列，短探針含有Seq?ID?No.10所示序列；第六組探針的長探針含有Seq?ID?No.11所示序列，短探針含有Seq?ID?No.12所示序列；第七組探針的長探針含有Seq?ID?No.13所示序列，短探針含有Seq?ID?No.14所示序列；第八組探針的長探針含有Seq?ID?No.15所示序列，短探針含有Seq?ID?No.16所示序列；第九組探針的長探針含有Seq?ID?No.17所示序列，短探針含有Seq?ID?No.18所示序列；第十組探針的長探針含有Seq?ID?No.19所示序列，短探針含有Seq?ID?No.20所示序列；第十一組探針的長探針含有Seq?ID?No.21所示序列，短探針含有Seq?ID?No.22所示序列。需要說明的是，本申請的第一組探針至第十一組探針中每組探針都是針對某個轉(zhuǎn)基因成分設計的，在實際檢測中，可以根據(jù)實際要求選用其中部分或者全部。

進一步的，本申請的探針中還包括第十二組探針至第十五組探針中的至少一組，同樣的，這些探針中每組探針分別含有長探針和短探針，長探針的5’端具有磷酸化修飾；第十二組探針的長探針含有Seq?ID?No.23所示序列，短探針含有Seq?ID?No.24所示序列；第十三組探針的長探針含有Seq?ID?No.25所示序列，短探針含有Seq?ID?No.26所示序列；第十四組探針的長探針含有Seq?ID?No.27所示序列，短探針含有Seq?ID?No.28所示序列；第十五組探針的長探針含有Seq?ID?No.29所示序列，短探針含有Seq?ID?No.30所示序列。需要說明的是，第十二組探針至第十五組探針中，每組探針都是針對某個作物的內(nèi)源基因設計的，在實際檢測中，可以根據(jù)實際要求選用其中某個或某幾個探針與需要檢測的靶標轉(zhuǎn)基因成分的探針一起使用。