[發明專利]一種用于人乳腺癌特異性甲基化檢測的引物、探針及其應用

有效

• 申請號: 201310250013.X
• 申請日: 2013-06-21
• 公開（公告）號: CN103333962A
• 公開（公告）日: 2013-10-02
• 發明（設計）人: 龐達;單明
• 申請（專利權）人: 黑龍江省醫學科學院
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 北京科龍寰宇知識產權代理有限責任公司 11139
• 代理人: 孫皓晨;費碧華

1.一種用于人乳腺癌特異性甲基化檢測的引物和探針，其特征在于所述的引物和探針分別具有如下所示序列：

正向引物：5-AGGYGGGAGGTTTATAGAGGG-3

反向引物：5-AACTCCCRACRCRACTCATA-3

探針：5-AGGCGCGTCGCGTT-3。

2.如權利要求1所述的引物和探針，其特征在于用于人乳腺癌特異性甲基化檢測時，包括如下步驟：

（1）將待檢組織DNA進行硫化處理，取硫化后DNA，作為RT-PCR的反應模板；

（2）按RT-PCR反應總體積的1/10～1/20體積比例加入模板，加入正向引物，反向引物和探針，使得正向引物，反向引物和探針在RT-PCR反應體系中的終濃度分別為0.25μM、0.25μM和0.2μM，按常規方法及劑量加入其它試劑；

（3）95℃預變性，3min；95℃變性，10s，60℃復性及延伸，30s，循環30次；

（4）熒光定量檢測結果：如果在閾值2043.06507以上出現特異性擴增曲線，結果為陽性；反之，結果為陰性。

3.一種用于診斷人乳腺癌的Real-time?PCR甲基化檢測試劑盒，其特征在于包括權利要求1或2所述的特異性引物和探針。

4.如權利要求3所述的試劑盒，其特征在于還包括10xPCR緩沖液，50mMMgCl₂，10μM?dNTPs，5U/μl?Taq酶。

5.權利要求1或2所述的特異性引物和探針在制備檢測人乳腺癌試劑中的應用。

6.權利要求3或4所述的試劑盒在制備檢測人乳腺癌試劑中的應用。