[發(fā)明專利]一種可同時檢測多個HBV耐藥突變位點的新方法有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201310249437.4 | 申請日： | 2013-06-22 |
| 公開（公告）號： | CN103320531A | 公開（公告）日： | 2013-09-25 |
| 發(fā)明（設計）人： | 歐啟水;劉燦;商紅艷;曾勇彬;陳添彬 | 申請（專利權）人： | 福建醫(yī)科大學附屬第一醫(yī)院 |
| 主分類號： | C12Q1/70 | 分類號： | C12Q1/70;C12Q1/68;C12R1/93 |
| 代理公司： | 福州元創(chuàng)專利商標代理有限公司 35100 | 代理人： | 蔡學俊 |
| 地址： | 350005 福*** | 國省代碼： | 福建;35 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 同時 檢測 hbv 耐藥 突變 新方法 | ||
1.一種可同時檢測多個乙型肝炎病毒耐藥突變位點的檢測方法，步驟為：
1）設計和合成一對引物，如SEQ?ID?No.1-2所示；
2）提取乙型肝炎病毒DNA，并以步驟1所述的一對引物為擴增引物進行擴增，測定擴增產(chǎn)物的熔解溫度Tm；依據(jù)熔解溫度Tm，通過改變擴增變性溫度確定關鍵變性溫度Tc；
3）通過Tc建立COLD-PCR反應體系條件并反應得到COLD-PCR產(chǎn)物；
4）將COLD-PCR產(chǎn)物進行sanger雙向序列測定。
2.如權利要求1所述的檢測方法，其特征在于所述的COLD-PCR包括以下兩種方式：fast?COLD-PCR和full?COLD-PCR。
3.如權利要求2所述的檢測方法，其特征在于fast?COLD-PCR的反應條件為：
95℃預變性30s；95℃變性10s，56℃退火延伸30s，5個循環(huán)；Tc℃變性20s，56℃退火延伸30s，35個循環(huán)。
4.如權利要求2所述的檢測方法，其特征在于full?COLD-PCR的反應條件為：
95℃預變性30s；95℃變性10s，56℃退火延伸30s，5個循環(huán)；95℃變性3s，70℃雜交120s，?Tc℃再變性20s，56℃退火延伸30s，35個循環(huán)。
5.如權利要求1所述的檢測方法，其特征在于Tc為83.0℃。
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