[發明專利]P110δ突變失活小鼠模型的應用

在審

• 申請號: 201310248169.4
• 申請日: 2013-06-20
• 公開（公告）號: CN103316360A
• 公開（公告）日: 2013-09-25
• 發明（設計）人: 王麗京;鄭凌云;何曉東;李衛東;邢麗英
• 申請（專利權）人: 廣東藥學院
• 主分類號: A61K49/00
• 分類號: A61K49/00;A61K33/14;A61D1/00
• 代理公司: 廣州嘉權專利商標事務所有限公司 44205
• 代理人: 譚英強

技術領域

本發明涉及P110δ突變失活小鼠模型的應用。

背景技術

動脈瘤（aneurysm），是一種具有高致死性的臨床常見的血管性疾病。好發于主動脈各部，尤其以腹主動脈瘤更為常見。其起病隱匿，早期不易診斷，呈進行性發展，大部分病人入院前動脈瘤已破裂導致死亡，而能入院確診的病人往往病灶處已呈破裂傾向，臨床常只能以外科手術方式降低動脈瘤破裂風險，目前尚無有效的藥物可用于治療。

動脈瘤的發病機理較為復雜，目前主要認為是一種慢性炎癥性血管病變。其在病理形態上主要表現為血管壁內彈力膜的顯著丟失或破裂，中層平滑肌細胞大量減少，官腔明顯增大伴有局部膨出，外膜下有明顯的炎癥細胞浸潤。

現階段絕大部分動脈瘤的研究主要集中在動脈瘤進行性發展到后期呈現出上述典型病理改變后的相關信號途徑上，特別是單核細胞、淋巴細胞浸潤及其分泌的眾多炎癥因子和基質金屬蛋白酶被認為是造成動脈瘤的主要原因。但由于其病變發展呈現多樣性，且不同部位形成的動脈瘤具有較大的差異，因此近來有研究提出針對性的研究動脈瘤始動階段的發病機制則對預測和研發有效的藥物治療具有更大的臨床價值，特別是動脈瘤發病部位的血管壁本身病變被認為可能是誘發其形成的關鍵因素。

而目前用于研究動脈瘤的動物模型較為局限，主要是針對研究動脈瘤進展到后期的病理機制較為理想，可形成典型的動脈瘤病灶。但所采用的動物其血管壁本身結構完整，并不易誘發動脈瘤形成，因此成模率較低。如利用普通的大鼠、小鼠或家兔為研究對象，通過氯化鈣、彈力酶以及血管緊張素II藥物并結合高脂飲食或機械刺激進行大約6-12周誘導使其形成典型的動脈瘤病灶；但制備過程需要多種因素結合且成模周期長，成模率較低。

基因工程小鼠作為疾病動物模型具有比普通小鼠更多優勢，其可在整體水平更自然的模擬臨床上疾病的發生發展過程，提供在RNA、蛋白質、形態學或生理學等不同水平直接觀察與疾病發生密切相關的基因在活體內的變化情況，以及其表達產物所引起的表型效應的可能，從而可有效地將復雜的生物學問題分解為多個因素分別進行考察，也能將涉及多系統或多學科的問題集中到同一個體內進行綜合考察，這就使得復雜生命現象的研究變得相對簡單和可行。而且在活體動物中進行研究，能兼顧類似于人體內的各種背景因素，研究結論通常具有很高的可靠性。

比如目前廣泛為國內外公認且采用的apoE^-/-小鼠。其與野生型小鼠相比，易在高脂飲食下誘發動脈粥樣硬化的典型病理表現，從而縮短成模周期，而且與人類動脈粥樣硬化發生具有相似的機制，為研究動脈粥樣硬化提供了可靠的動物模型。

但是目前除了apoE小鼠外，針對心血管系統其它疾病尚未找到類似的理想動物模型。因此如能找到一種本身具有動脈瘤發病傾向適合用于動脈瘤始動階段發病機制研究的基因工程小鼠，將為深入闡明動脈瘤這種高致死性疾病的發病機制、尋找早期有效治療藥物的關鍵靶點并進一步為大規模臨床前動物實驗提供更好的研究平臺。

發明內容

本發明的一個目的在于公開P110δ突變失活小鼠模型在研究動脈瘤發生機理中的應用以及其在篩選治療動脈瘤藥物中的應用。

本發明還提供了利用頸總動脈結扎以及氯化鈣孵育兩種方法構建動脈瘤動物模型的方案。

本發明首次發現并在其基礎上建立了一種能早期模擬動脈瘤形成的基因工程動物——p110δ突變失活小鼠（p110δ-mutant?mice）（p110δ為I類PI3K（磷脂酰肌醇3激酶）催化亞基的一個類別，可稱為I類PI3K激酶催化亞基δ；英文正式寫法為p110δ^D910A）。該基因工程小鼠首次構建于2002年，其主要用于研究與B/T淋巴細胞的免疫缺陷相關的分子機制研究（詳細見參考文獻：Okkenhaug?K,?Bilancio?A,?Farjot?G,?Priddle?H,?Sancho?S,?Peskett?E,?Pearce?W,?Meek?SE,?Salpekar?A,?Waterfield?MD,?Smith?AJ,?Vanhaesebroeck?B.?Impaired?b?and?t?cell?antigen?receptor?signaling?in?p110delta?pi?3-kinase?mutant?mice.?Science.?2002;297:1031-1034）。該小鼠大體生長、發育情況與正常小鼠無顯著差異，存在自發的結腸炎癥性病變，其炎癥相關的細胞因子IL-2，TNF-alpha等表達較正常升高。