[發明專利]遲緩愛德華氏菌菌毛蛋白FimA的應用

無效

• 申請號: 201310244839.5
• 申請日: 2013-06-19
• 公開（公告）號: CN103405760A
• 公開（公告）日: 2013-11-27
• 發明（設計）人: 孫黎;王沖;胡永華;孫鉑光
• 申請（專利權）人: 中國科學院海洋研究所
• 主分類號: A61K39/02
• 分類號: A61K39/02;A61K39/39;A61P31/04
• 代理公司: 沈陽科苑專利商標代理有限公司 21002
• 代理人: 周秀梅;李穎

技術領域

本發明涉及分子生物學領域，具體的說是遲緩愛德華氏菌菌毛蛋白FimA的應用。?

背景技術

遲緩愛德華氏菌菌毛蛋白FimA是菌毛的主要組成成分，其分子量為18.4KDa。由于其在細菌侵染時可起到增強細菌對宿主的吸附能力，故菌毛在細菌致病過程中發揮著重要的作用。研究發現遲緩愛德華氏菌FimA具有凝集紅細胞的能力，fimA基因突變導致遲緩愛德華氏菌侵染細胞以及組織的能力降低。因此，菌毛蛋白FimA是一個毒力因子，有望應用于細菌的病害防控。?

發明內容

本發明目的在于提供一種遲緩愛德華氏菌菌毛蛋白FimA的免疫應用。?

為實現上述目的，本發明采用的技術方案為：?

一種遲緩愛德華氏菌菌毛蛋白FimA的應用，遲緩愛德華氏菌菌毛蛋白FimA作為亞單位疫苗蛋白。?

所述遲緩愛德華氏菌菌毛蛋白FimA與佐劑混配可作為遲緩愛德華氏菌亞單位疫苗。?

所述遲緩愛德華氏菌菌毛蛋白FimA與佐劑按體積比為1:1。?

一種遲緩愛德華氏菌菌毛蛋白FimA的應用，遲緩愛德華氏菌菌毛蛋白FimA可作為疫苗佐劑應用于疫苗中。?

本發明具有如下優點：本發明的菌毛蛋白FimA作為亞單位疫苗能夠有效保護魚類抵抗遲緩愛德華氏菌感染，作為佐劑能夠顯著提高疫苗的免疫保護效應。?

附圖說明

圖1為本發明實施例提供的純化的菌毛蛋白FimA電泳圖譜，其中，泳道1，分子量標準。?

具體實施方式

下面結合實施例對本發明作進一步說明。實施例旨在對本發明進行舉例描述，而非以任何形式對本發明進行限制。?

在本發明實施例中所涉及到的常規性實驗方法均采用如下方法：?

1.質粒提取、DNA(PCR)產物純化、DNA片段從凝膠中回收皆使用“天根生化科技(北京)有限公司”的相應試劑盒。?

2.大腸桿菌用Hanahan方法（Sambrook?and?Russell:Molecular?Cloning:A?Laboratory?Mannual.Cold?Spring?Harbor?Laboratory?Press?2001）。?

3.所有限制性內切酶和連接酶皆購自于“紐英倫生物技術有限公司”，北京。?

實施例1?

菌毛蛋白FimA表達質粒pEtFimA的構建：?

本發明的菌毛蛋白FimA的序列已公開（GenBank?accession?No.YP_003295086.1）。?

另菌毛蛋白FimA可按如下方式獲得：以遲緩愛德華氏菌TX1為模板，用引物F1和R1進行PCR擴增。PCR條件為：94℃60s預變性模板DNA,然后94℃40s,55℃60s,72℃60s,5個循環后改為94℃40s,65℃60s,72℃60s,30個循環后再在72℃延伸反應7－10min。PCR產物用天根的相應試劑盒純化。將載體pET259（pET259構建過程參見Zheng?W,Hu?Y,Zhang?M,Sun?L.2010.Analysis?of?the?expression?and?antioxidative?property?of?a?peroxiredoxin?6?from?Scophthalmus?maximus.Fish?Shellfish?Immunol.29，305–311.?

）用SwaI酶切后回收5.4kb片段，將其與上述純化的PCR片段用T4DNA連接酶于室溫連接2－4小時，連接液轉化入大腸桿菌DH5α，在含卡那霉素（30ug/ml）的LB培養基上培養18－24小時,篩選轉化子提取質粒，即為質粒pEtFimA。?

所述LB組成成分按重量百分比計：1.0%蛋白胨,0.5%酵母粉,1.0%氯化鈉,97.5％蒸餾水。所述菌株TX1于2008年1月9號保存于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心CGMCC，保藏單位地址為北京市朝陽區大屯路，保藏編號為：CGMCC?No.2330，分類命名為遲緩愛德華氏菌（Edwardsiella?tarda），所述F1為5’-CCCGGGATGAAGAAAATTTTACTGCCTGTT-3’；R1為5’-CCCGGGTTTATATTCGATGGTGAACGGG-3’。?

實施例2?

重組菌毛蛋白FimA的誘導表達和純化?